10.3969/j.issn.1008-9691.2022.04.006
血必净通过调控自噬减轻脓毒症炎症反应和肺损伤的实验研究
目的 分析血必净对脓毒症小鼠的炎症反应、肺损伤及肺组织细胞的自噬情况.方法 选择40只雄性SPF级ICR小鼠,按照随机数字表法平均分为假手术组(Sham组,在无菌条件下只进行开腹操作)、脓毒症模型组〔采用盲肠结扎穿孔术(CLP)建立脓毒症模型〕、脓毒症+自噬抑制剂3-甲基腺嘌呤(3-MA)组(CLP+3-MA组)、脓毒症+血必净组(CLP+血必净组)和CLP+血必净+3-MA组.CLP+3-MA组CLP前1 h腹腔注射3-MA 15 mg/kg;CLP+血必净组CLP前2 h腹腔注射血必净注射液6 mL/kg;CLP+血必净+3-MA组在CLP+血必净组基础上于术前1 h腹腔注射3-MA 15 mg/kg.制膜后24 h取小鼠静脉血及肺脏,采用酶联免疫吸附试验(ELISA)分别检测各组小鼠静脉血中白细胞介素(IL-6、IL-1β)、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)水平,采用蛋白质免疫印迹试验(Western blotting)测定各组小鼠肺组织中自噬标志物微管相关蛋白1轻链3(LC3-Ⅱ、LC3-Ⅰ)的相对蛋白表达,采用苏木素-伊红(HE)染色观察各组小鼠肺脏组织病理学改变.结果 与Sham组比较,CLP组IL-6、IL-1β、TNF-α水平均明显升高,肺组织LC3-Ⅰ、LC3-Ⅱ蛋白表达及LC3-Ⅱ/LC3-Ⅰ比值明显增加,表明制模成功.与CLP组比较,CLP+3-MA组IL-6、IL-1β、TNF-α水平均明显升高〔IL-6(ng/L):1441.41±88.64比847.69±182.03,IL-1β(ng/L):73.97±65.17比11.66±4.82,TNF-α(ng/L):499.10±621.42比49.19±29.61,均P<0.05〕,而CLP+血必净组IL-6、IL-1β、TNF-α水平均明显下降 〔IL-6(ng/L):380.33±168.49比847.69±182.03,IL-1β(ng/L):4.65±1.85比11.66±4.82,TNF-α(ng/L):8.20±6.21比49.19±29.61,均P<0.05〕;CLP+3-MA组LC3-Ⅰ、LC3-Ⅱ蛋白表达及LC3-Ⅱ/LC3-Ⅰ比值均显著降低〔LC3-Ⅰ(mg/L):37.60比41.80,LC3-Ⅱ(mg/L):11.60比25.99,LC3-Ⅱ/LC3-Ⅰ比值:0.31比0.62,均P<0.05〕;而CLP+血必净组LC3-Ⅰ、LC3-Ⅱ蛋白表达均显著降低,但LC3-Ⅱ/LC3-Ⅰ比值显著增加(LC3-Ⅱ/LC3-Ⅰ比值:0.66比0.62,均P<0.05);CLP+血必净+3-MA组上述指标均无明显变化.HE染色结果显示,CLP组与CLP+血必净+3-MA组肺组织肺泡腔出现大量红细胞、炎症细胞和血浆样物质渗出,肺泡间隔和肺泡壁明显增厚不均,部分肺泡腔塌陷;CLP+3-MA组严重程度更甚于CLP组;CLP+血必净组肺组织呈一定程度水肿和炎症浸润,但严重程度不及CLP组.结论 血必净注射液可以改善脓毒症小鼠的肺损伤和炎症反应、抑制自噬.
血必净注射液、脓毒症、自噬、肺损伤、基础实验
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R392.12;R644;R97
国家自然科学基金81871600
2022-10-27(万方平台首次上网日期,不代表论文的发表时间)
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