缺血后处理对肠缺血/再灌注损伤大鼠回肠胱硫醚-γ-裂解酶/硫化氢通路的影响

摘要：

目的 探讨缺血后处理(PC)对肠缺血/再灌注(I/R)损伤大鼠回肠组织胱硫醚-γ-裂解酶/硫化氢(CSE/H2S)通路的影响.方法 将30只健康雄性Wistar大鼠按随机数字表法分为假手术组(Sham组)、?I/R组和I/R+PC组,每组10只.采用无损伤血管夹阻断肠系膜上动脉(SMA)后恢复血流的方法建立肠I/R损伤模型;Sham组仅分离SMA后关腹.I/R+PC组于制模1?h后采用反复阻断SMA并恢复血流的方法进行PC;I/R组持续阻断SMA血流2?h.实验结束后处死大鼠,取下腔静脉血和回肠组织,苏木素-伊红(HE)染色后光镜下观察回肠组织病理学改变,并进行病理学评分;采用原位末端缺刻标记法(TUNEL)观察回肠上皮细胞凋亡情况;采用敏感硫电极法测定血浆和回肠组织H2S水平;采用反转录-聚合酶链反应(RT-PCR)及蛋白质免疫印迹试验(Western?Blot)检测回肠组织CSE、胱硫醚-β-合成酶(CBS)的mRNA和蛋白表达.各指标间相关性采用直线相关分析.结果 与Sham组比较,I/R组HE染色显示有大量腺上皮细胞脱落,绒毛水肿、出血,TUNEL染色显示有大量棕黄色的凋亡回肠上皮细胞,病理学评分和凋亡指数(AI)均显著升高,血浆和回肠组织H2S水平明显降低,回肠组织CSE的mRNA和蛋白表达显著下降.给予PC干预后,I/R+PC组回肠组织病理学改变明显减轻,凋亡细胞明显减少,定量分析显示病理学评分和AI均较I/R组明显降低〔病理学评分(分):2.34±0.23比4.25±0.37,AI:0.32±0.07比0.55±0.04,均P<0.01〕;同时I/R+PC组血浆和回肠组织H2S水平均较I/R组明显升高〔μmol/L:血浆为31.25±3.62比21.43±3.17,回肠组织为38.24±3.48比25.39±3.41,均?P<0.01〕;RT-PCR和Western?Blot结果显示,I/R+PC组回肠组织CSE的mRNA和蛋白表达均较I/R组明显上调〔CSE?mRNA(CSE/GAPDH):0.45±0.03比0.27±0.04,CSE蛋白(CSE/GAPDH):0.62±0.02比0.42±0.04,均P<0.01〕.各组回肠组织CBS的mRNA和蛋白表达差异均无统计学意义(均P>0.05).相关性分析显示,血浆和回肠组织H2S水平与回肠病理学评分、AI均呈显著负相关(血浆:r值分别为-0.59、-0.67;回肠组织:r值分别为-0.65、-0.61,均P<0.01);CSE的mRNA和蛋白表达与回肠病理学评分、AI均呈显著负相关?(CSE?mRNA:r值分别为-0.59、-0.62,CSE蛋白:r值分别为-0.63、-0.56,均P<0.01).结论?PC可以通过上调肠I/R损伤大鼠CSE/H2S通路表达对肠组织发挥保护作用.

关键词：缺血/再灌注损伤、回肠、缺血后处理、硫化氢、胱硫醚-γ-裂解酶

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资助基金：国家自然科学基金青年基金;浙江省衢州市科技指导性项目;浙江省义乌市人才引进立项项目

在线出版日期：2020-05-07（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共4页

页码：142-145