人源性CD3抗体诱导食蟹猴T淋巴细胞培养方法的建立

摘要：

目的:在初步分析人、食蟹猴和猪CD3蛋白同源性的基础上,建立利用人源性CD3抗体诱导食蟹猴外周血T淋巴细胞的体外分离培养技术.方法:从NCBI查询获取人类、食蟹猴和猪CD3蛋白各自的氨基酸序列,并用DNAMAN软件进行序列比对、同源性分析和构建系统进化树.Western blotting检测三种T细胞膜上CD3蛋白的表达水平.分离健康食蟹猴PBMC,分为3组,A组加入抗人CD3抗体单刺激、B组加入IL-2单刺激、C组加入抗人CD3抗体和IL-2共刺激.倒置显微镜下观察细胞生长状态并计数,绘制细胞生长曲线,锥虫蓝染色检测细胞活性,流式细胞术检测T细胞表面标志物CD3、CD4、CD8的表达.结果:食蟹猴、猪的CD3蛋白氨基酸序列与人类的同源性分别为86.9％、65.6％,T细胞膜上CD3蛋白的表达量分别为人的79％、17％.A组细胞不增殖;C组细胞增殖能力、细胞活性及CD3表达率[(93.8±3.6)％vs (70.3±4.7)％,P＜0.01]均显著高于B组,细胞生长曲线呈S形,符合Logistic生长曲线;C组T细胞高表达CD3,T细胞纯度较高,且CD8+T细胞占比较多.结论:食蟹猴外周血T淋巴细胞膜表面能表达和人同源性很高的CD3蛋白,在人源性CD3抗体、IL-2和1％PHA共刺激下能诱导食蟹猴外周血T淋巴细胞的增殖分化,获得生长状态良好、增殖能力强、纯度较高的T淋巴细胞.

关键词：同源性、抗人CD3抗体、T淋巴细胞、食蟹猴、诱导培养

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分类号：R73-35(肿瘤学)

资助基金：云南省科技计划项目重大项目资助2016FC007;云南省细胞治疗技术转化医学重点实验室资助No.2015DG034. Project supported by the Key Foundation of Science and Technology Program in Yunnan Province2016FC007;the Yunnan Key Laboratory of Cell Therapy Technology Translational Medicine2015DG034

在线出版日期：2018-07-02（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共7页

页码：407-413