ABCB1(G1199A)基因稳定转染HEK293细胞株的建立

摘要：

目的:将ABCB1 (G1199A)突变型和野生型基因分别转入HEK293细胞,建立P-糖蛋白稳定表达细胞株.方法:以野生型ABCB1基因的cDNA为模板质粒,采用PCR点突变的方法合成突变的ABCB1 (1199A)基因;在慢病毒的介导下,将实验室构建的pLVX-ABCB1-PGK-Puro和pLVX-ABCB1-mut-PGK-Puro重组质粒转染HEK293细胞,经嘌呤霉素筛选稳定表达的细胞;通过流式细胞术检测P-糖蛋白的表达、RT-PCR检测ABCB 1基因的转录水平、CCK-8方法测定外源基因对HEK293细胞增殖的影响.结果:流式细胞术证实P-糖蛋白在HEK193细胞中稳定过表达,RT-PCR确定转染细胞中存在ABCB1 (G1199A)基因mRNA的过表达,成果获得ABCB 1 (G1199A)野生型和突变型基因的稳定表达细胞株.结论:成功建立两种ABCB1 (G1199A)稳定表达的HEK293细胞株,为该酶的功能研究奠定了基础.

关键词：P-糖蛋白、稳定转染、过表达

所属期刊栏目：35

分类号：R96(药理学)

资助基金：湖北省自然科学基金编号:2014CKB489

在线出版日期：2016-01-16（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页码：2110-2115