异土木香内酯通过线粒体和PI3K/AKT通路诱导MCF-7细胞凋亡的研究
目的 研究异土木香内酯对MCF-7细胞的增殖抑制作用及诱导凋亡作用与PI3K/Akt通路和线粒体通路的关系.方法 本实验采用四甲基偶氮唑蓝(MTT)法和磺酰罗丹明B(sulforhodamine B,SRB)法考察了异土木香内酯对MCF-7细胞的增殖抑制作用,并将2种方法所测结果进行拟合比较;采用Hoechst 33258染色荧光显微镜观察给药24h后诱导细胞凋亡的变化;透射电镜观察异土木香内酯给药24h后细胞超微结构的变化;罗丹明123荧光标记,激光共聚焦扫描显微镜检测异土木香内酯对MCF-7细胞线粒体膜电位的影响;Western blot检测异土木香内酯给药后对MCF-7细胞内Bcl-2、Bax、Akt、p-Akt蛋白表达的影响;活性比色法检测给药后细胞内caspase-3活性的影响.结果 异土木香内酯对MCF-7细胞具有较好的增殖抑制作用,且呈剂量依赖性,MTT法与SRB法测得的IC50分别为15.21和14.908 μg·mL-1,拟合结果基本吻合;Hoechst 33258荧光染色法观察细胞形态发现,异土木香内酯可以诱导MCF-7细胞发生凋亡,随给药剂量增加,细胞核形态均发生不同程度的改变;透射电镜结果显示,不同给药剂量下,细胞出现了典型的细胞凋亡早、中、晚期特征;机制研究表明,异土木香内酯可以通过PI3K/Akt途径和线粒体途径共同诱导MCF-7细胞凋亡.异土木香内酯作用于癌细胞后,下调抗凋亡蛋白Bcl-2的表达量,使位于胞质的促凋亡蛋白Bax表达增加并转位于线粒体,同时,降低Akt的磷酸化(p-Akt)水平,导致线粒体膜电位紊乱,使线粒体膜通透性和完整性遭到破坏,通过一系列变化,使caspase-3活性被激活,最终诱导细胞凋亡.结论 异土木香内酯对乳腺癌MCF-7细胞具有较好的抗增殖活性,其对MCF-7抗增殖活性可通过诱导细胞凋亡来实现,PI3K/Akt途径和线粒体途径是其诱导细胞凋亡的途径之一.
异土木香内酯、MCF-7细胞、PI3K/Akt、线粒体通路
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R284.1(中药学)
大学科研项目17XN072
2018-08-29（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）
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