对香豆酸组合物对白血病细胞的增殖抑制作用及机制
目的 研究对香豆酸组合物(total coumarins of Hedyotis diffusa,TCHD)对急性髓系白血病(AML)细胞的增殖抑制作用及其机制.方法 采用乙醇回流法提取TCHD,超高效液相色谱串联质谱系统(UPLC-MS/MS)检测其纯度.用不同浓度的TCHD (0.02、0.04、0.06、0.08、0.10 mg·mL-1),作用于对数生长期的Kasumi-1细胞、KG-1细胞、THP-1细胞、U937细胞和K562细胞,四甲基偶氮唑蓝(MTT)法检测各细胞增殖;作用于Kasumi-1细胞24 h后,采用Annexin V/PI流式细胞术检测细胞凋亡情况;运用流式细胞术检测药物作用后Kasumi-1细胞周期阻滞情况;Western blot法检测PARP、caspase-3、caspase-9、caspase-8蛋白活性的变化;以及CDK4/6、cyclin Dl、CDK2、p-CDK2、cyclin E、p21等细胞周期相关蛋白的变化.结果 TCHD在一定浓度范围内对AML细胞增殖有明显的抑制作用,对Kasumi-1、KG-1、THP-1、U937和K562细胞的IC50 (24 h vs 48 h)分别为0.077 vs 0.059(mg·mL-1)、0.083 vs 0.067(mg·mL-1)、0.096 vs 0.072(mg· mL-1)、0.087 vs 0.064(mg· mL-1)、0.096 vs 0.068(mg·mL-1),对Kasumi-1的抑制作用表现最明显,并且呈时间-浓度依赖性(r=0.357,P＜0.05).不同浓度(0,0.02,0.04,0.06,0.08,0.10 mg·mL-l)的TCHD作用于Kasumi-1细胞株24h后,凋亡率分别是(5.33±0.41)％、(7.99±0.45)％、(10.22±0.32)％、(20.10±1.99)％、(28.66±0.67)％和(33.24±2.12)％.0.02 ～0.06 mg·mL-1的TCHD处理Kasumi-1细胞24h后用流式细胞术检测到该细胞G0/G1期的比例依次为(51.43±3.21)％、(62.91 ±2.35)％和(76.42±4.14)％,与空白对照组[(35.8±5.25)％]比较,差异均有统计学意义(P值均＜0.05).Western blot结果显示,不同浓度的TCHD能浓度依耐性激活caspase-8 (P ＜0.01)、caspase-9、caspase-3和PARP(其余P＜0.05),促进细胞色素C的表达;显著下调cyclin E、CDK6、CDK2、p-CDK2、cyclin D1,和上调p21(P ＜0.01).结论 TCHD抑制白血病细胞株Kasumi-1的增殖呈时间浓度依赖性,其凋亡机制一方面与其激活caspase-3、caspase-9、PARP蛋白有关,另一方面则通过影响CDK2、p-CDK2、CDK4/6、cyclin E、cyclin D1和p21使Kasumi-1细胞被阻滞于G0/G1期,抑制细胞增殖.
急性髓系白血病、对香豆酸组合物、细胞凋亡、细胞周期
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R965(药理学)
2017-11-10（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）
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