人源化抗血管内皮生长因子单克隆抗体质控方法的建立

摘要：

目的 建立人源化抗血管内皮生长因子(vascular endothelial growth factor,VEGF)单克隆抗体的质控方法.方法 采用还原/非还原型毛细管凝胶电泳(CE-SDS)测定人源化抗VEGF单抗的纯度;在0.5和25.0 mg·mL-1浓度条件下,采用分子排阻高效液相色谱(SE-HPLC)测定制品中单体和聚合物含量;毛细管等电聚焦电泳(cIEF)测定其等电点;阳离子交换高效色谱(CEX-HPLC)测定电荷异构体含量;反相高效色谱(RP-HPLC)和LC-MS检测Lys-C酶切后制品肽图;人血管内皮细胞(human umbilicalvein endothelial cells,HuVEC)增殖抑制试验测定其生物学活性;其余项目按照2015年版《中国药典》要求进行.结果 人源化抗VEGF单抗原液和成品的还原型CE-SDS的纯度分别(97.77±0.25)％和(97.43±0.57)％,非还原型CE-SDS纯度分别为(98.97±0.15)％和(98.73±0.06)％;0.5 mg·mL-1浓度下,原液和成品的单体含量分别为(98.07±0.55)％和(98.20±0.52)％;25.0 mg·mL-1浓度下,原液和成品的聚合物含量分别为(2.00±0.53)％和(1.93±0.55)％;CEX-HPLC检测原液和成品的酸性区含量分别为(18.33±0.64)％和(18.60±0.44)％,主峰含量分别为(69.03±0.80)％和(69.20±0.44)％,碱性区含量分别为(12.70±1.37)％和(12.20±0.87)％;cIEF和LC-MS测定原液和成品的等电点和肽图均与参比品一致;HUVEC增殖抑制法测定原液和成品的生物学活性分别为参比品的(107±6)％和(100±10)％.其他各项指标均符合《中国药典》要求及其他相关要求.结论 初步建立了人源化抗VEGF单克隆抗体的质控方法,可用于该制品的常规质量控制.

关键词：人血管内皮生长因子、人源化抗体、质量控制

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分类号：R917(药物基础科学)

资助基金：国家科技重大专项重大新药创制资助项目2014ZX09304311-001

在线出版日期：2016-08-11（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页码：1101-1106