稳定表达人寡肽转运体1的细胞模型构建及应用

摘要：

目的 构建稳定表达人寡肽转运体1(hPepT1)的马丁-达比犬肾细胞模型(MDCK-hPepT1),并将其应用于中药单体中人寡肽转运体1抑制剂的筛选.方法 构建重组质粒pcDNA3.1(+)-hPepT1,将其转染马丁-达比犬肾系细胞,经G418筛选后以有限稀释法挑选单克隆细胞.以人寡肽转运体1荧光底物β-Ala-Lys (AMCA)和经典底物Glysar对单克隆细胞转运活性进行验证；通过反转录聚合酶链式反应验证人寡肽转运体1在转录水平的表达.以中药单体对Glysar摄取的影响实现人寡肽转运体1抑制剂的筛选.结果 获得的两株单克隆细胞(D19、A11)对β-Ala-Lys (AMCA)摄取均显著高于转染空载体的马丁-达比犬肾系细胞,对Glysar的摄取分别为转染空载体细胞的24、11倍；D19、A11中hPepT1的mRNA水平亦显著高于转染空载体的细胞；已知的人寡肽转运体1抑制剂(底物)显著减少单克隆细胞D19和A11对Glysar的摄取；部分中药单体对Glysar摄取产生不同程度的抑制.结论 本实验成功构建了稳定高表达人寡肽转运体1的马丁-达比犬肾系细胞模型,并应用该模型筛选出对人寡肽转运体1具有潜在抑制作用的中药单体.

关键词：人寡肽转运体1、马丁达比犬肾上皮细胞、细胞模型、中药、单体

所属期刊栏目：48

分类号：R965(药理学)

资助基金：国家自然科学基金资助项目81072689;浙江省钱江人才项目J20100471

在线出版日期：2013-03-08（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共5页

页码：13-17