鲨肝活性肽S-8300的克隆、分泌表达及重组产物活性研究

摘要：

目的 研究鲨肝活性肽S-8300的克隆、分泌表达及重组产物活性.方法 根据从鲨鱼肝脏中分离纯化到的S-8300的N端氨基酸序列,设计了一套简并引物,利用RT-PCR方法从再生鲨肝组织的总RNA中扩增到一条cDNA片段,大小为342 bp.结果 根据序列分析及氨基酸序列推测的结果,表明这个cDNA片段的N端与S-8300 N端15个氨基酸序列完全一致,genebank和NCBI的搜索结果表明这个cDNA片段是一个新的序列.将这个cDNA片段插入到信号肽pelB基因下游,成功构建了原核分泌表达质粒pET22b-S,将该质粒转化进大肠杆菌BL21(DE3)中成功构建了工程茵pET22b-S/BL21(DE3).通过对重组茵诱导条件(诱导温度、诱导剂IPTG的浓度)的筛选,SDS-PAGE分析,结果表明,在25℃,0.4 mmol·L~(-1)IPTG诱导条件下,S-8300在信号肽pelB引导下能够高效的分泌至周质腔中.结论 活性研究表明,该分泌表达产物具有与天然S-8300相似的减轻链脲霉素对NIT-1细胞损伤的作用.

关键词：S-8300、克隆、分泌表达、生物活性

所属期刊栏目：45

分类号：R915(药物基础科学)

资助基金：国家高技术研究发展计划（863计划）;国家自然科学基金

在线出版日期：2010-04-09（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共5页

页码：93-97