荧光探针示踪pDNA/壳聚糖纳米粒在细胞内转运

摘要：

目的 采用荧光探针追踪质粒DNA(pDNA)/壳聚糖(CS)纳米粒在细胞内转运轨迹,分析CS介导的细胞转染屏障.方法 绿色荧光蛋白质粒基因作为报告基因进行体外转染实验,用异硫氰酸荧光素分别标记pDNA和CS,荧光显微镜下观察细胞对pDNA/CS纳米粒的吸附,流式细胞技术测定细胞对pDNA/CS纳米粒的摄取率,激光扫描共聚焦显微镜下观察pDNA/CS纳米粒在细胞内转运和入核过程.结果 pDNA/CS纳米粒以小聚集体形式吸附在细胞表面,细胞吸附受介质pH值的影响.流式细胞仪定量分析表明,细胞对pDNA/CS纳米粒有高摄取率,共温孵4 h,细胞摄取率为88.8%.激光扫描共聚焦显微图像显示,pDNA/CS纳米粒依赖细胞内吞功能经细胞(内外)转运通道进入细胞.pDNA/CS纳米粒与细胞共温孵3 h,CS主要分布在胞浆中,pDNA不仅分布在胞浆中,核内也清楚可见荧光标记的pDNA.结论 荷正电的pDNA/CS纳米粒以小聚集体形式被细胞吸附,通过细胞胞吞作用进入细胞.pDNA/CS纳米粒主要在胞浆中解离,pDNA入核.实验提示,增加pDNA/CS纳米粒在胞浆中解离将有助于提高CS介导的转染效率.

关键词：壳聚糖、质粒DNA、纳米粒、胞内转运

所属期刊栏目：43

分类号：R915(药物基础科学)

资助基金：基金项目:国家自然科学基金资助项目30572272

在线出版日期：2008-07-17（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共5页

页码：727-731