10.3881/j.issn.1000-503X.15052
微小RNA-22-3p调控Kruppel样因子6表达对骨髓间充质干细胞心肌样分化的影响
目的 探究微小RNA-22-3p(miR-22-3p)调控Kruppel样因子6(KLF6)表达对骨髓间充质干细胞(BMSC)心肌样分化的影响.方法 分离并培养大鼠BMSC,将第3代BMSC分为对照组、5-氮杂胞苷(5-AZA)组、模拟物阴性对照组、miR-22-3p模拟物组、miR-22-3p模拟物+空载质粒组、miR-22-3p模拟物+KLF6过表达质粒组;实时荧光定量PCR(qRT-PCR)检测细胞中miR-22-3p及KLF6表达;免疫荧光化学染色法检测细胞结蛋白(Desmin)、肌钙蛋白T(cTnT)、间隙连接蛋白43(Cx43)表达;Western blot检测Desmin、cTnT、Cx43、KLF6蛋白表达;流式细胞术检测BMSC凋亡情况;采用双荧光素酶报告基因实验分析miR-22-3p和KLF6的靶向关系.结果 与对照组比较,5-AZA组BMSC中miR-22-3p(q=7.971,P＜0.001)、Desmin(q=7.876,P＜0.001)、cTnT(q=10.272,P＜0.001)、Cx43 表达(q=6.256,P＜0.001)以及细胞凋亡率(q=12.708,P＜0.001)显著增加,而 KLF6mRNA(q=20.850,P＜0.001)及蛋白表达(q=11.080,P＜0.001)显著降低;与5-AZA组和模拟物阴性对照组比较,miR-22-3p模拟物组BMSC中miR-22-3p(q=3.591,P＜0.001;q=11.650,P＜0.001)、Desmin(q=5.975,P＜0.001;q=13.579,P＜0.001)、cTnT(q=7.133,P＜0.001;q=17.548,P＜0.001)、Cx43 表达(q=4.571,P=0.037;q=11.068,P＜0.001)显著增加,而 KLF6 mRNA(q=7.384,P＜0.001;q=28.234,P＜0.001)及蛋白表达(q=4.594,P=0.036;q=15.945,P＜0.001)显著降低,miR-22-3p模拟物组细胞凋亡率显著低于5-AZA组(q=8.216,P＜0.001);与miR-22-3p模拟物+空载质粒组比较,miR-22-3p模拟物+KLF6过表达质粒组KLF6 mRNA(q=23.891,P＜0.001)及蛋白表达(q=13.378,P＜0.001)显著增加,Desmin(q=9.505,P＜0.001)、cTnT(q=10.985,P＜0.001)、Cx43 表达(q=8.301,P＜0.001)显著降低,细胞凋亡率增加(q=4.713,P=0.029).双荧光素酶报告基因实验发现KLF6是miR-22-3p的潜在靶基因.结论 miR-22-3p通过抑制KLF6表达来促进BMSC心肌样分化.
微小RNA-22-3p、Kruppel样因子6、骨髓间充质干细胞、心肌样分化
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R541.9(心脏、血管（循环系）疾病)
国家自然科学基金81770296
2023-03-21（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）
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