10.3881/j.issn.1000-503X.13278
葛根素通过miR-490/E3泛素连接酶抑制非小细胞肺癌细胞生长、侵袭和迁移
目的 研究葛根素抑制非小细胞肺癌细胞生长、侵袭和迁移的机制.方法 培养A549细胞,采用不同浓度的葛根素处理细胞.CCK-8法检测细胞增殖抑制率(IR);qRT-PCR法检测细胞中miR-490和E3泛素连接酶(DTL) mRNA的表达情况;构建miR-490过表达对照组、miR-490过表达模拟物组、miR-490沉默阴性对照组、miR-490沉默组,采用双荧光素酶报告分析miR-490和DTL的靶向关系.将20 μmol/L葛根素处理过的细胞分为对照组、葛根素组、葛根素+miR-490阴性对照组、葛根素+ miR-490沉默模拟物组、葛根素+miR-490沉默模拟物+DTL阴性对照组、葛根素+miR-490沉默模拟物+DTL沉默质粒组.Transwell法检测细胞迁移和侵袭.Western blot检测上皮细胞一间充质转化进程标志因子E一钙黏蛋白(E-cadherin)、N一钙黏蛋白(N-cadherin)和波形蛋白(Vimentin)的表达.结果 随着葛根素浓度升高,细胞抑制率逐步升高,差异有统计学意义(F=105.375,P＜0.001);且miR-490表达逐步升高(F=32.919,P＜0.001),DTL表达逐步降低(F=116.120,P＜0.001).双荧光素酶报告分析显示,与miR-490过表达对照组相比,miR-490过表达模拟物组荧光素酶活性显著降低(=7.762,P=0.016),miR-490mRNA表达显著升高(t=13.319,P＜0.001),DTL mRNA表达显著降低(t=7.415,P=0.002);与miR-490沉默阴性对照组相比,miR-490沉默组细胞中miR-490表达显著降低(t=9.523,P=0.001),DTL mRNA的表达显著升高(t=11.305,P＜0.001).Westem blot检测结果显示,与miR-490过表达对照组相比,miR-490过表达模拟物组的DTL蛋白表达显著降低(t=7.953,P=0.001);与miR-490沉默阴性对照组相比,miR-490沉默组细胞中的DTL蛋白表达显著升高(t=10.552,P＜0.001).经葛根素处理后,与对照组相比,葛根素组细胞miR-490表达显著升高(t=10.255,P=0.001),DTL mRNA表达显著降低(t=6.682,P=0.003);与葛根素+miR-490阴性对照组相比,葛根素+ miR-490沉默模拟物组细胞中miR-490表达显著降低(t=10.995,P＜0.001),DTL mRNA表达显著升高(t=12.478,P＜0.001);与葛根素+miR-490沉默模拟物+DTL阴性对照组相比,葛根素+miR-490沉默模拟物+ DTL沉默质粒组细胞miR-490表达差异无统计学意义(t=1.081,P=0.341),DTL mRNA表达显著降低(t=l4.321,P＜0.001).与葛根素+miR-490阴性对照组相比,葛根素+miR-490沉默模拟物组DTL蛋白表达显著升高(t=11.423,P＜0.001);与葛根素+miR-490沉默模拟物+DTL阴性对照组相比,葛根素+miR-490沉默模拟物+DTL沉默质粒组细胞的DTL蛋白表达显著降低(t=12.080,P＜0.001).与对照组相比,葛根素组细胞增殖能力显著降低(F=129.27,P＜0.001);与葛根素+miR-490阴性对照组相比,葛根素+miR-490沉默模拟物组细胞增殖能力显著升高(F=75.12,P＜0.001);与葛根素+miR-490沉默模拟物+DTL阴性对照组相比,葛根素+miR-490沉默模拟物+DTL沉默质粒组细胞增殖能力显著降低(F=52.59,P＜0.001).与对照组相比,葛根素组细胞迁移能力显著降低(t=8.963,P=0.001);与葛根素+ miR-490阴性对照组相比,葛根素+miR-490沉默模拟物组细胞迁移能力显著升高(t=12.117,P＜0.001);与葛根素+ miR-490沉默模拟物+DTL阴性对照组相比,葛根素+miR-490沉默模拟物+DTL沉默质粒组细胞迁移能力显著降低(t=12.934,P＜0.001).与对照组相比,葛根素组细胞侵袭能力显著降低(t=4.710,P=0.009);与葛根素+miR-490阴性对照组相比,葛根素+miR-490沉默模拟物组细胞侵袭能力显著升高(t=13.264,P＜0.001);与葛根素+miR-490沉默模拟物+DTL阴性对照组相比,葛根素+miR-490沉默模拟物+DTL沉默质粒组细胞侵袭能力显著降低(t=13.476,P＜0.001).与对照组相比,葛根素组E-cadherin蛋白表达显著升高(t=7.137,P=0.002),N-cadherin(f=8.828,P=0.001)和Vimentin蛋白表达(=6.594,P=0.003)显著降低;与葛根素+miR-490阴性对照组相比,葛根素+ miR-490沉默模拟物组细胞中E-cadhefin蛋白表达显著降低(t=12.376,P＜0.001),N-cadherin(t=13.436,P＜0.001)和Vimentin蛋白表达(t=11.467,P＜0.001)显著升高;与葛根素+miR-490沉默模拟物+DTL阴性对照组相比,葛根素+ miR-490沉默模拟物+DTL沉默质粒组E-eadherin蛋白表达显著升高(t=13.081,P＜0.001),N-eadherin(t=10.835,P＜0.001)和Vimentin蛋白表达(t=11.862,P＜0.001)显著降低.结论 葛根素可能是通过上调miR-490表达,降低其靶基因DTL的表达,抑制非小细胞肺癌的生长、侵袭和迁移.
葛根素;miR-490;E3泛素连接酶;非小细胞肺癌;生长;迁移
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R734.2(肿瘤学)
河北省中医药管理局项目2016194
2022-03-28（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）
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