腺病毒介导反义RNA抑制HIV-1辅助受体CCR5和CXCR4表达
目的 抑制细胞表面人免疫缺陷病毒1型(HW-1)的辅助受体CCR5和CXCR4表达,阻止HIV-1进入靶细胞.方法 逆转录聚合酶链反应扩增HIV-1辅助受体基因5'-端cDNA片段,反向插入穿梭质粒中,再与腺病毒基因组骨架质粒在大肠杆菌BJ5183中同源重组,重组质粒在293细胞中包装、扩增得到含有CCR5、CXCR4反义RNA的重组腺病毒,分别感染U937细胞和MT4细胞,于感染后24、48和72 h及10 d时用流式细胞仪检测细胞表面相应受体的表达.并用Boyden小室法检测重组腺病毒感染对细胞趋化活性的影响以及用3H掺入法检测对细胞增殖能力的影响.结果 成功获得含有CCR5和CXCR4反义RNA的重组腺病毒,其滴度为5×1011PFU/ml和7×101o PFU/ml.重组腺病毒感染24 h后流式细胞仪检测显示,U937细胞表面CCR5的表达率分别为:Ad-antiR5 1.12%,未感染细胞对照82.10%,Ad-senseR5 80.94%,Ad-control 81%.MT4细胞表面CXCR4的表达率分别为:Ad-antiX4 1.03%,未感染细胞对照42%,Ad-senseX4 44%,Ad-control 39%.48、72 h及10 d后Ad-antiR5感染的U937细胞表面CCR5表达率分别为:1.02%、1.26%、1.23%;Ad-antiX4感染的MT4细胞表面CXCR4表达率分别为:1.13%、1.17%、1.22%.感染重组腺病毒后,两种细胞的趋化活性及增殖能力均无改变.结论 包含有CCR5、CXCR4反义RNA的重组腺病毒可以使细胞表面相应受体表达下降,且重组腺病毒不影响细胞的趋化活性和增殖能力.
重组腺病毒、辅助受体、反义RNA、抑制
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R512.91(传染病)
国家自然科学基金30371266
2006-12-04（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）
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626-631
