人干细胞因子在大肠杆菌中的表达研究

摘要：

目的经过改造重组人干细胞因子(human stem cell factor,hSCF),提高其表达量.方法应用人工合成寡核苷酸引物及PCR技术,改变人干细胞因子hSCF cDNA起始密码子ATG与SD序列之间的距离及在翻译起始区(即N端氨基酸)部分采用大肠杆菌(E.coli)喜用型密码子的策略,使重组表达质粒pBV220-hSCF在E.coli中获得高效稳定表达.结果DNA序列测定证明基因的阅读框架完全正确.重组人干细胞因子的表达量从改造前占E.coli总蛋白的12%提高到40%左右.纯化的重组hSCF N端17个氨基酸测序结果表明,除第一个氨基酸为甲硫氨酸外,其余与天然hSCF序列完全一致.纯化的重组hSCF经Western blot证明,与标准hSCF一致.结论提示hSCF cDNA的5′侧翼区结构对其基因表达有显著的影响.

关键词：重组人SCF、高效稳定表达、SD序列

所属期刊栏目：20

分类号：Q75;Q784(分子遗传学)

资助基金：国家科技攻关项目96-C02-01-10

在线出版日期：2004-01-08（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共6页

页码：279-284