肿瘤特异性Surivivin启动子调控的FAK shRNA靶向治疗肝癌的实验研究

摘要：

目的:探讨肿瘤特异性Surivivin启动子调控的FAK shRNA靶向治疗肝癌的疗效.方法:根据GenBank中Surivivin基因序列设计引物,在上下游引物5'端引入相应酶切位点,以HepG2基因组DNA为模板扩增Surivivin启动子基因片段.体外合成最小polyA转录中止信号,以pSUPER.retro.puro载体为媒介构建新的干涉载体pS-surP-shRNA-mpA(pS/surP),完成干涉靶点的选取并完成干涉载体的构建和鉴定;建立细胞培养和转染及稳定转染细胞系,完成FAK RNAi的干扰效应性检测,进行体外细胞增殖及凋亡实验.结果:重组质粒完成DNA提取后,PCR扩增,经琼脂糖凝胶电泳后获得1条预期大小的特异性皮带,质粒Surivivin启动子调控的FAK shRNA涉及符合要求.将目的片段与肿瘤特异性Surivivin启动子调控的FAK shRNA慢性载体表达载体连接的阳性克隆序列,获得DNA序列证实含有目的序列片段,提示质粒构建成功;PCR仪结果显示:Surivivin启动子调控的FAK shRNA在肝癌细胞中表达水平较低,抑制率能达到73.33%;Western blotting法结果显示:转染后,与未转染的HepG2细胞相比,转染后肝癌细胞Surivivin含量明显下降;流式细胞仪结果表明:细胞转染后,肿瘤特异性Surivivin启动子调控的FAK shRNA细胞凋亡率为24.39%,与未转染细胞的4.12%比较,差异有统计学意义(P<0.05).结论:肿瘤特异性Surivivin启动子调控的FAK shRNA靶向治疗肝癌可明显抑制肿瘤细胞的增殖,控制肿瘤的侵袭与转移.

关键词：肿瘤特异性、Surivivin启动、FAKshRNA、靶向治疗

所属期刊栏目：14

分类号：R73;R71

资助基金：江西省教育厅科学技术研究项目14687

在线出版日期：2017-11-14（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共4页

页码：27-30