扩增孕妇血浆中游离胎儿DNA构建方法及其对产前诊断21-三体综合征中价值研究
目的 建立扩增孕妇血浆中游离胎儿DNA (cffDNA)的方法,并对该方法在21-三体综合征产前诊断中的应用价值进行分析,以期提高21-三体综合征产前检出率,提高优生率.方法 选择2014年10月～ 2017年4月本院行产前优生优育检查的60例高危21-三体综合征胎儿孕妇作为研究对象,取所有孕妇的空腹肘静脉血进行PCR扩增血浆中游离胎儿DNA的方法构建研究,提取血浆中胎儿游离DNA,分别在76 ～ 83℃温度条件下对不同长度的DNA模板进行扩增,分别在76.6 ～ 86.6℃温度条件下对连接DNA进行整体扩增,分别在80 ～ 86.9℃温度条件下对整体扩增的影响,在81.4 ～ 86.9℃温度对整体扩增效率的影响.总结不同温度对cffDNA监测时PCR扩增的效果影响,根据上述结果构建扩增片段长度多态性(AFLP)方法检测cffDNA的方法.对60例孕妇cffDNA按照传统和新构建的AFLP方法对不同的模板进行扩增,比较两种ALFP对不同长度目的产物片段的整体效率并比较.分别进行60例孕妇中49例行羊膜腔穿刺取羊水行胎儿DNA检测,11例孕妇流产,孕妇流产过程中取羊水进行DNA检测.对60例孕妇cffDNA按照传统和新构建的AFLP方法分别进行21-三体综合征检测.以羊膜腔穿刺DNA检测和流产胎儿组织DNA检测结果为金标准,计算传统和新构建AFLP方法检测的cffDNA中21-单体综合征的敏感度、特异度、准确度.结果 79.9～82.4℃温度范围可有效提高＜300bp片段的cffDNA小片段扩增,而＞300bp片段扩增效果差,这一温度范围可有效分离母体DNA与胎儿游离DNA. 80.4℃-82.4℃可有效区分链接后cffDNA模板扩增图像,82.6℃-84.2℃变性温度可有效区分片段长度500bp目标片段,选择80-83℃扩增温度条件是适合cffDNA扩增效果的变性温度.新构建AFLP扩增法可有效提升产前诊断21-三体综合征的诊断特异度度和准确度.结论 在一定范围内降低PCR反应的变性温度能够引起cfDNA连接接头后整体扩增中大片段模板不能有效扩增,同时不影响小片段模板的扩增.可达到和有效区分母源性和胎源性DNA的效果,提升诊断的准确率,提升产前遗传优生指导正确性.
21-三体综合征、扩增孕妇血浆中游离胎儿DNA、羊膜腔穿刺DNA筛查
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R714.55(妇产科学)
2018-01-26（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）
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30-32,57
