SEDL基因及其突变体真核表达载体的构建与鉴定

摘要：

目的 构建SEDL基因及其突变体与增强型绿色荧光蛋白(EGFP)表达载体的融合表达质粒pEGFP-C3-SEDL并获得表达.方法 分别提取X连锁迟发性脊柱骨骺发育不良(SEDT)患者和正常对照外周血淋巴细胞RNA,RT-PCR方法扩增SEDL基因cDNA,双酶切后克隆至pEGFP-C3空载体,构建表达质粒pEGFP-C3-SEDL.双酶切和DNA测序鉴定后,转染COS-7细胞,通过流式细胞仪和荧光显微镜观察重组蛋白表达情况.结果 DNA测序显示重组真核表达载体pEGFP-C3-SEDL构建成功,SEDL基因c.370-371ins A突变位点被成功克隆到突变体重组质粒中.荧光倒置显微镜观察证实重组质粒均能在细胞内进行蛋白表达.结论 SEDL基因及其突变体真核表达载体的成功构建为其进一步研究SEDL基因突变致SEDT的分子机制奠定了基础.

关键词：SEDL基因、绿色荧光表达载体、迟发性脊柱骨骺发育不良

所属期刊栏目：18

分类号：R394.3

资助基金：江苏省科技厅生殖健康研究技术服务平台项目BM2008151

在线出版日期：2010-06-12（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页码：7-9,35