鬼臼毒素诱导离体大鼠附睾上皮细胞凋亡机制研究

摘要：

目的 探讨鬼臼毒素(podophyllotoxin, PPT)抑制SD大鼠附睾上皮细胞增殖作用,揭示其诱导凋亡的相关分子机制.方法 体外培养大鼠原代附睾上皮细胞,CCK-8法检测鬼臼毒素作用24、48、72 h后对细胞增殖的影响;透射电镜观察细胞内部结构变化;AnnexinV-FITC/PI检测细胞凋亡率;原位末端标记法(TUNEL)观察细胞凋亡形态;RT-PCR技术研究TNF-α mRNA的变化;ELISA法检测鬼臼毒素对细胞培养上清液TNF-α水平的影响;Western blot 法检测细胞色素C、caspase-3、caspase-8、caspase-9蛋白的表达水平.结果 CCK-8结果显示,鬼臼毒素能明显抑制大鼠附睾上皮细胞增殖并诱导凋亡,并呈剂量及时间依赖性(P<0.05),24、48、72 h的半数抑制浓度(95％置信区间)分别为59.36(15.50～227.41)、0.37(0.080～1.70)、0.077(0.017～0.35) μmol·L-1;透射电镜下观察发现,鬼臼毒素引起附睾上皮细胞形态变圆,细胞核破碎,线粒体空泡化;RT-PCR和ELISA检测结果显示,鬼臼毒素能升高TNF-α mRNA水平及细胞培养上清中TNF-α的含量;Western blot结果显示,鬼臼毒素能明显增加细胞中细胞色素C、caspase-3、caspase-8、caspase-9蛋白表达.结论 鬼臼毒素可通过线粒体调控的内源性通路和TNF受体介导的外源性通路,诱导大鼠附睾上皮细胞发生凋亡.

关键词：鬼臼毒素、生育力、大鼠附睾上皮细胞、细胞凋亡、线粒体、TNF-α、caspase活化

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分类号：R-332;R284.1;R322.64;R329.25;R697;R977.6(医学研究方法)

资助基金："十二五"国家科技支撑计划2012BAI31B08;国家自然科学基金资助项目81100463

在线出版日期：2017-09-30（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共7页

页码：1357-1363