RISK信号通路在β2-肾上腺素受体激动剂Clenbuterol减轻心肌细胞缺氧/复氧损伤中的作用

摘要：

目的：研究β2-肾上腺素受体激动剂clenbuterol对原代培养的心肌细胞缺氧/复氧损伤的作用及其是否与激活再灌注损伤挽救激酶( reperfusion injury salvage kinase, RISK)信号通路有关。方法将原代培养的新生Wistar大鼠乳鼠心肌细胞分为8组,①正常培养组；②缺氧/复氧( A/R)组；③clenbuterol(1μmol·L-1)+A/R；④ICI118,551(10μmol ·L-1)+clenbuterol(1μmol·L-1)+A/R组；⑤美托洛尔metoprolol(10μmol·L-1)+ clenbuterol (1μmol·L-1)+A/R组；⑥ metoprolol(10μmol·L-1)+A/R组；⑦ PD98059(20μmol·L-1)+clenbuterol(1μmol·L-1)+A/R 组；⑧LY294002(10μmol·L-1)+clenbuterol(1μmol·L-1)+A/R组。采用MTT法测定各组细胞存活率；比色法检测心肌细胞培养液的乳酸脱氢酶( LDH)含量；Hoechst 33342荧光染色法检测细胞凋亡率；分子探针DCFH-DA检测细胞内活性氧的水平；Western blot检测心肌细胞缺氧/复氧后ERK及p-ERK1/2蛋白的表达水平。结果与 A/R 组比较, clen-buterol+ A/R组明显增高细胞存活率,降低LDH 含量,降低细胞凋亡率, ROS产生减少, p-ERK1/2蛋白表达水平增高,而选择性β2受体阻断剂ICI 118,551可取消clenbuterol的上述作用,β1受体阻断剂Metoprolol对clenbuterol的作用无影响,PI3K抑制剂LY294002和ERK1/2抑制剂PD98059可阻断clenbuterol对心肌细胞缺氧/复氧损伤的保护作用。结论 clenbuterol能够减轻心肌细胞缺氧/复氧损伤,加入选择性β2受体阻断剂 ICI 118,551,PI3K 抑制剂 LY294002和ERK抑制剂PD98059均使clenbuterol的保护作用取消,表明clenbuterol可通过激动β2肾上腺素受体,激活RISK信号通路发挥抗心肌细胞缺氧/复氧损伤的作用。

关键词：clenbuterol、缺氧/复氧、心肌细胞、磷酸化 ERK、PI3K、reperfusion injury salvage kinase(RISK)

分类号：R-332;R322.11;R329.24;R392.11;R345.57;R845.22(医学研究方法)

资助基金：国家自然科学基金资助项目81303254,81102438;湖北省教育厅重点项目D20122402;湖北医药学院项目2010QDJ12和2012GPY11;武当特色中药研究湖北省重点实验室资助项目WDCM003

在线出版日期：2015-10-28（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共7页

页码：1368-1374