HIV-1整合酶3′端加工抑制剂筛选方法的建立与优化

摘要：

目的：建立与优化HIV-1整合酶3′端加工抑制剂筛选方法。方法利用荧光共振能量转移原理建立筛选方法,用DNaseⅠ切割底物 DNA确定底物检测波长,在该检测波长下,对缓冲液成分、底物浓度、酶浓度、金属离子浓度等影响整合酶活性的条件进行优化,并用阳性药物雷特格韦和杨梅黄素进行方法验证。结果检测波长为495 nm/525 nm,使用缓冲液1、底物浓度500 nmol·L-1,整合酶浓度1μmol· L-1,镁离子浓度20 mmol · L-1时整合酶3′端加工活性最强。在此反应条件下雷特格韦和杨梅黄素能有效地抑制整合酶3′端加工活性。用所建立的方法筛选到2个有较强抑制整合酶3′端加工活性的抑制剂。结论该文成功建立并优化了HIV-1整合酶3′端加工抑制剂筛选方法。

关键词：HIV-1、整合酶、3′端加工、荧光共振能量转移、影响因素、优化、抑制剂

分类号：R977.3;R978.7(药品)

资助基金：国家自然科学基金资助项目81102483;国家科技部“重大新药创制”重大专项课题2009ZX09501-029,2012ZX10001-006,2013ZX09103001-010

在线出版日期：2014-10-28（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共5页

页码：1469-1473