稳定表达CRFR1的HEK293细胞株建立与功能鉴定

摘要：

目的：建立稳定表达CRFR1的HEK293细胞株,并鉴定cAMP评价体系构建是否成功。方法采用Lipofectamine 2000将CRFR1质粒转染至HEK293细胞中,经G418筛选单克隆阳性细胞,采用Western blot技术、RT-PCR法、免疫荧光法证实稳定表达CRFR1细胞株构建成功。并用CRF刺激稳定表达 CRFR1的 HEK293细胞株,绘制 CRF 刺激HEK293-CRFR1细胞释放cAMP的量效曲线。结果 West-ern blot、RT-PCR、免疫荧光结果表明, CRFR1受体在HEK293细胞系中成功表达。 cAMP释放量效实验显示,CRF刺激 HEK293-CRFR1细胞释放 cAMP 的 EC50为(5.64±0.05)×10-10 mol · L-1。结论成功建立了稳定表达CRFR1的HEK293细胞株,并且cAMP含量评价体系构建成功,为研究CRFR1的生物学功能及筛选CRFR1受体靶向药物奠定了基础。

关键词：促肾上腺皮质激素释放因子、CRFR1、HEK293 细胞、转染、cAMP、G蛋白偶联受体

分类号：R329.2;R392.11;R394.2;R977.6(人体形态学)

资助基金：国家科技部“重大新药创制”科技重大专项2012ZX09301003-001;国家自然科学基金资助项目31350001

在线出版日期：2014-08-28（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共4页

页码：1113-1115,1116