P2X7受体介导异丙酚对缺氧海马突触前膜谷氨酸Ca2+依赖性释放的抑制作用
目的 观察嘌呤P2X7受体激动剂和拮抗剂以及异丙酚对大鼠缺氧海马突触前膜谷氨酸释放的影响及P2X7受体是否介导异丙酚的作用.方法 选用SD ♂大鼠,制备突触体,置入无糖并充以95% N2/5% CO2的人工脑脊液(aCSF)中进行缺氧实验.向无糖aCSF中加入P2X7受体特异性拮抗剂BBG(终浓度 1 μmol·L-1)或P2X7受体特异性激动剂BZATP(终浓度100 μmol·L-1).于缺氧前、缺氧20 min及40 min时测定孵育液中谷氨酸浓度,谷氨酸Ca2+非依赖性释放试验中将Ca2+、DHK(谷氨酸转运体抑制剂)从aCSF中去除.观察异丙酚对谷氨酸Ca2+依赖性释放的影响时,分别向无糖aCSF中加入1～100 μmol·L-1的异丙酚,然后进行缺氧40 min,测定孵育液中谷氨酸浓度并计算异丙酚的半效抑制浓度(IC50).观察P2X7受体在异丙酚抑制效应中的作用时,施加异丙酚(2倍IC50水平)、异丙酚和BBG(终浓度1 μmol·L-1)或异丙酚和BZATP(终浓度100 μmol·L-1).缺氧40 min后测定孵育液中谷氨酸浓度.结果 缺氧不同时点海马突触体谷氨酸Ca2+依赖性释放增加(P<0.01),BBG可完全抑制谷氨酸释放(P<0.01),BZATP则进一步使谷氨酸释放增加(P<0.01).谷氨酸Ca2+非依赖性释放在缺氧各时点无变化.异丙酚可浓度依赖性的抑制谷氨酸Ca2+依赖性释放,IC50为(27.4±5.2)μmol·L-1.55 μmol·L-1(2倍IC50)异丙酚与BBG或与BZATP共同作用下的谷氨酸Ca2+依赖性释放水平与单独应用异丙酚比较差异无显著性(P>0.05).结论 缺氧状态下,P2X7受体介导海马突触前膜谷氨酸Ca2+依赖性释放,异丙酚通过抑制P2X7受体而呈浓度依赖性的抑制谷氨酸Ca2+依赖性释放.
异丙酚、P2X7受体、海马、突触前膜、缺氧、谷氨酸
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R-332;R322.81;R392.11;R743;R845.22;R971.2(医学研究方法)
国家自然科学基金资助项目30471657
2010-11-10（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）
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