重组融合蛋白抗CD20Fab-LDM的构建、表达及体外活性研究

摘要：

目的 构建和表达抗CD20Fab-LDP(力达霉素辅基蛋白)融合蛋白,制备强化融合蛋白抗CD20Fab-LDM(力达霉素),并测定该融合蛋白的生物学活性.方法 采用PCR和overlap PCR方法构建抗CD20Fab-LDP融合蛋白,并用双脱氧终止法测定DNA序列;采用亲和层析法纯化该产物,并用Western blot鉴定纯化产物;采用FACS方法鉴定纯化产物与靶细胞的结合活性;采用冷乙二醇法制备强化融合蛋白抗CD20Fab-LDM;采用MTT法鉴定抗CD20Fab-LDM对CD20+ Raji细胞特异性的细胞毒作用.结果 DNA序列测定结果表明抗CD20Fab-LDP融合蛋白已构建成功,可溶性表达产物的产量可达4 mg·L~(-1)以上,具有与Raji细胞(CD20+)结合的活性,与抗CD20Fab的亲合常数相当,抗CD20Fab-LDM体外能特异性杀伤Raji细胞,IC_(50)值为0.9×10~(-10) mol·L~(-1).结论 成功地构建了抗CD20Fab-LDP融合蛋白,并获得可溶性高效表达,表达产物具有与相应靶抗原结合的活性,并成功制备了抗CD20Fab-LDM强化融合蛋白,体外能特异性杀伤CD20~+的Raji细胞.

关键词：CD20、力达霉素、基因工程抗体、免疫治疗、非霍奇金淋巴瘤、生物毒素

所属期刊栏目：25

分类号：R392.1;R733.405;R979.1

资助基金：天津市科技发展计划资助项目05YFGZGX02800

在线出版日期：2010-03-23（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共5页

页码：1650-1654