GATA1不同激酶活性突变体质粒的构建及蛋白表达和亚细胞定位

摘要：

目的 采用大引物法构建GATA1不同激酶活性突变体GATA1 S161A S187A(死型)和GATA1 S161D S187D(激活型)真核表达载体,并证实其融合蛋白在细胞内的表达及定位,旨在进一步探讨其生物学功能和潜在肿瘤治疗靶点.方法 以GFP-GATA1WT为模板,采用大引物法扩增S161A S187A、S161D S187D突变体片段,双酶切克隆至pEGFP-C1表达载体中,将重组质粒转染至HEK293中,经免疫印迹鉴定融合蛋白的表达.结果 用大引物PCR法成功构建GATA1不同激酶活性突变体的真核表达载体pEGFP-GATA1 S161A S187A和pEGFP-GATA1 S161D S187D,验证了其融合蛋白表达.共聚焦激光显微镜技术显示,融合蛋白主要定位于细胞核内.结论 利用大引物法成功构建GATA1不同激酶活性突变体真核表达载体,并为进一步进行该突变体的结构和功能研究奠定了基础.

关键词：GATA1、PAK5、磷酸化、基因克隆、融合蛋白、转染

所属期刊栏目：47

分类号：R730.23;Q782(肿瘤学)

资助基金：国家自然科学基金81372546

在线出版日期：2018-08-13（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共5页

页码：22-26