EMAP-Ⅱ对紧密连接相关蛋白occludin和ZO-1相互作用的调节和机制

摘要：

目的 研究内皮一单核细胞激活多肽Ⅱ(EMAP-Ⅱ)对血肿瘤屏障(BTB)紧密连接相关蛋白occludin和ZO-1分布和相互作用的影响,以及蛋白激酶C(PKC)活性的变化,探讨PKC在EMAP-Ⅱ开放紧密连接中的作用.方法 提取和培养大鼠脑微血管内皮细胞,建立体外BTB模型;实验分为7组,即模型组、EMAP-Ⅱ0.5 h组、EMAP-Ⅱ1h组、EMAP-Ⅱ2h组、EMAP-Ⅱ3h组、EMAP-Ⅱ6h组和EMAP-Ⅱ12h组.应用Milicell-ERS系统检测体外BTB模型跨内皮细胞阻抗值的变化;双重免疫荧光检测内皮细胞中紧密连接相关蛋白occludin和ZO-1的分布和定位;免疫共沉淀检测内皮细胞中occludin和ZO-1的结合水平;PKC活性检测试剂盒检测体外BTB模型内皮细胞中总PKC的活性.结果 与模型组相比,EMAP-Ⅱ显著降低了体外BTB模型的踌内皮细胞阻抗值,增加了BTB通透性;在模型组,紧密连接相关蛋白occludin和ZO-1在内皮细胞边缘呈连续分布,并且二者存在共定位,EMAP-Ⅱ能够使occludin和ZO-1在内皮细胞边缘的分布减少,二者的共定位减弱;免疫共沉淀结果也显示EMAP-Ⅱ能够减弱occludin和ZO-1的结合;上述作用在EMAP-Ⅱ作用1h时效果最显著(P＜0.01);同时发现EMAP-Ⅱ作用后,BTB模型内皮细胞中PKC的活性显著升高,在EMAP-Ⅱ作用1h时达峰值(P＜0.01).结论 EMAP-Ⅱ能够调节紧密连接相关蛋白occludin和ZO-1在内皮细胞的相互作用,开放紧密连接;PKC可能是EMAP-Ⅱ影响occludin和ZO-1相互作用、调节紧密连接的机制之一.

关键词：内皮-单核细胞激活多肽Ⅱ、occludin、ZO-1、蛋白激酶C、血肿瘤屏障

所属期刊栏目：41

分类号：R341.6(人体生物化学、分子生物学)

资助基金：国家自然科学基金资助项目30973079,81072056,30872656,30670723;辽宁省教育厅高校科研计划L2010569;沈阳市科学基金F10-205-1-22;教育部专项科研基金20092104110015,20102104120023,20102104110009

在线出版日期：2013-02-28（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共5页

页码：481-484,493