原癌基因USP22启动子的克隆及转录活性分析

摘要：

目的克隆原癌基因USP22部分启动子序列,探讨其转录活性.方法应用cDNA 5＇末端快速扩增(5′RACE)方法定位USP22基因转录起始点；在此基础上针对其5＇端非编码区处包括转录起始点在内的-2 828～+52片段进行PCR扩增,产物克隆入荧光素酶表达载体pGL3-Basic.重组质粒与内参质粒pRL-TK共转染HepG2与Hela细胞,双荧光素酶活性检测确定其转录活性.结果成功确定USP22基因转录起始位点,酶切及测序结果证实USP22基因5＇端非编码区2 880 bp序列正确插入到荧光素酶报告基因载体pGL3-Basic.重组质粒pGL3-USP22 promoter转染HepG2细胞和Hela细胞后,检测到荧光素酶的高表达(P＜0.05).结论 成功构建具有转录活性的USP22启动子片段,为进一步研究USP22表达调控机制奠定基础.

关键词：USP22基因、启动子、报告基因

所属期刊栏目：40

分类号：R730.3(肿瘤学)

资助基金：国家自然科学基金资助项目31000581;江西省科技支撑计划资助项目2010BSA14000;江西省自然科学基金资助项目2010GQY0199

在线出版日期：2013-02-28（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共4页

页码：580-583