流式细胞术在小鼠局部淋巴结试验中的应用研究
目的 将流式细胞术应用到小鼠局部淋巴结实验(local lymph node assay,LLNA)中,期望建立既可检测化学物致敏性也可同时检测刺激性的方法.方法 受试物分为溶剂对照”AOO(丙酮∶橄榄油=4∶1)”、阴性对照(NaCl)、致敏阳性物”己基肉桂醛(HCA)、2,4二硝基氯苯(DNCB)、2-氨基酚(2-APC)”、刺激阳性物”KOH、十二烷基硫酸钠(SLS)”.采用8～10周龄16～22 g的雌性Balb/c小鼠76只,随机分为19个受试物剂量组,每剂量组4只小鼠.每种受试物分别设低、中、高3个剂量组,检测浓度分别为NaCl (100g/L、200 g/L、300 g/L)、HCA (V/V:3.3％、10.0％、30.0％)、DNCB (2.5 g/L、5.0 g/L、10.0g/L)、2-APC (12.5g/L、25.0g/L、50.0 g/L)、KOH (25 g/L、50 g/L、100 g/L)、SLS(50 g/L、100 g/L、200 g/L).于试验第1、2、3天将配制后不同浓度受试物稀释液以每耳25 μl/d均匀涂布于小鼠双侧耳后.检测小鼠耳缘厚度、耳引流淋巴结重量、B220+ (CD45R)亚群淋巴细胞百分数等指标.采用SPSS 11.5分析软件,对数据型指标进行方差分析,并对有差异的个体再行LSD两两比较,并根据刺激指数对受试物致敏性大小进行分级.结果 与溶剂对照比较中高剂量的SLS和KOH均可引起小鼠耳缘厚度增加(P＜0.01).可判定SLS、KOH对皮肤有刺激性.DNCB、HCA各剂量组和2-APC高剂量组刺激指数均大于3,可以判断该3种化学物为皮肤致敏物.根据SI计算EC3的值,对致敏物进行分类:DNCB (0.196)为强致敏物,HCA (1.556)和2-APC (3.156)为中等致敏物.结论 应用流式细胞术(flow cytometry,FCM)检测B220+ (CD45R)亚群淋巴细胞百分数作为致敏性观察指标的改良小鼠淋巴结实验,结合耳缘厚度检测可实现同时评价化学物的皮肤致敏性和刺激性.
局部淋巴结试验、小鼠、致敏性、刺激性、流式细胞术
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R114;R994.6(卫生基础科学)
浙江省科技计划项目2011C37086
2014-10-08（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）
477-481
