NADC30-like谱系猪繁殖与呼吸综合征病毒荧光定量PCR检测方法的建立及应用

摘要：

为定量检测NADC30-like谱系猪繁殖与呼吸综合征病毒(NADC30-likePRRSV),本研究针对NADC30PRRSV株的ORF6基因保守区域设计1对特异性引物,通过优化反应条件,建立了一种灵敏度高、耗时短、操作简便且可量化的SYBR Green Ⅰ荧光定量PCR检测方法.建立的标准曲线结果显示:Ct值与质粒标准品浓度之间存在良好的线性关系,相关系数(R2)为0.995.该方法特异性强,除对NADC30-like PRRSV有特异性扩增外,对猪圆环病毒2型(PCV2)、猪塞尼卡病毒(SVA)、牛病毒性腹泻病毒(BVDV)、猪细小病毒(PPV)、经典型猪繁殖与呼吸综合征病毒(C-PRRSV)和NADC34-like PRRSV等病原均无扩增.对质粒标准品的检测下限可达4.62×101拷贝/μL,敏感性为常规PCR方法的100倍.组内变异系数与组间变异系数均小于1％,重复性较好.利用该方法与常规PCR方法同时检测53份血清样品,该方法的阳性检出率为11.3％(6/53),高于普通PCR的阳性检出率(9.4％,5/53),二者的总符合率为89.11％.本研究建立的SYBR GreenⅠ荧光定量PCR方法可以用于NADC30-like PRRSV的快速检测,为PRRS的防控提供技术支持.

关键词：SYBR GreenⅠ荧光定量PCR;猪繁殖与呼吸综合征病毒;建立

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分类号：S852.65(动物医学（兽医学）)

资助基金：国家重点研发计划项目2018YFD0500803、2018YFD0500104

在线出版日期：2021-08-13（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共6页

页码：495-500