基于猪流行性腹泻病毒N蛋白间接ELISA抗体检测方法的建立及初步应用

摘要：

为建立猪流行性腹泻病毒(PEDV)变异株间接ELISA抗体检测方法,本研究通过RT-PCR方法扩增PEDV变异强毒株N基因并克隆至pQE30载体后进行原核表达,对表达的蛋白进行纯化和鉴定.用纯化的重组N蛋白作为包被抗原,通过矩阵法优化ELISA反应条件,建立了检测PEDV抗体的间接ELISA方法,并对其进行特异性、敏感性和重复性试验.对500份来源于不同猪场的临床血清样品进行检测,并将检测结果与进口商品化试剂盒比较.结果显示,表达的重组蛋白约为50.4ku,westernblot结果表明其反应原性良好.该ELISA方法的最优反应条件为:重组N蛋白最佳包被浓度为2μg/mL;血清最佳稀释度为1∶100,作用时间1h;羊抗猪HRP-IgG最适稀释度为1∶5000,作用时间为30min;TMB最佳显色时间为10min.该方法可特异性检测PEDV抗体,而与PRV、PRRSV、CSFV、PCV、TGEV等病原的阳性血清均无交叉反应;该方法检测出阳性血清的最高稀释倍数与中和试验结果基本一致,具有较高的敏感性;批内、批间重复性试验的变异系数均小于10%,具有较好的重复性和稳定性.对500份临床猪血清的检测结果,与进口商品化试剂盒检测结果相比符合率为99.6%.本研究为PEDV抗体检测提供了一种有效的血清学方法.

关键词：猪流行性腹泻病毒、变异强毒株、N蛋白、原核表达、间接ELISA

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分类号：S855.3(动物医学（兽医学）)

资助基金：河南省科技创新人才项目,豫科人组[2016] 4号174200510003;河南省科技攻关重点项目142102310224

在线出版日期：2019-12-04（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共6页

页码：1021-1026