口蹄疫病毒实时荧光RT-RPA快速检测方法的建立

摘要：

为建立一种简单、快速、特异的口蹄疫病毒(FMDV)分子检测方法,本研究基于FMDV的3D基因,设计特异性引物和exo探针,建立了用于FMDV快速检测的等温实时荧光反转录重组酶聚合酶(Real-timeRT-RPA)方法.该方法采用便携式等温扩增仪-Genie Ⅲ实时监测扩增结果,40℃20 min即可完成检测.结果 显示,FMDV RT-RPA方法能够特异性扩增FMDV 3D基因,而对水泡性口炎病毒、猪繁殖与呼吸综合征病毒、猪瘟病毒、脑心肌炎病毒等均无扩增;以体外转录的FMDV 3D RNA作为模板,该方法在95％置信区间检出下限为1.0×102拷贝/μL,组内和组间变异系数均小于1％;使用43份含有灭活FMDV的模拟临床样品分析显示,RT-RPA对FMDV的检出率为34.9％(15/43),略低于荧光定量RT-PCR的检出率(39.5％,17/43),而两种方法的符合率为95.3％(41/43).RT-RPA能够在6 min～16 min内完成检测,而实时荧光RT-PCR则需要30 min～51 min.本研究所建立的实时荧光RT-RPA方法反应快速,特异性强,灵敏性高,操作简单,结合便携式具有荧光检测功能的等温扩增仪Genie Ⅲ,组建了FMDV快速检测平台,在基层兽医部门,尤其在野外及疫情现场的FMDV检测中具有极大的应用潜力,为设备仪器有限的实验室和田间对FMDV的快速检测提供了一种有效的方法,对于条件有限地区FMD的防控具有重要意义.

关键词：口蹄疫病毒、3D基因、exo探针、实时荧光RT-RPA

所属期刊栏目：41

分类号：S852.65(动物医学（兽医学）)

资助基金：河北省自然科学基金青年项目C2017325001;河北省现代农业羊产业体系项目编号326-0710-JSN-DDDC;河北省高校百名优秀创新人才支持计划SLRC2017039;河北省高校百名优秀创新人才支持计划ⅢSLRC2017039;河北省现代农业产业技术体系羊产业创新团队专项资金HBCT2018140204

在线出版日期：2019-05-06（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共6页

页码：168-173