绵羊肺炎支原体降落PCR-侧向层析快速检测方法的建立

摘要：

为建立一种简易、快速、特异性强的绵羊肺炎支原体(Mo)检测方法,本研究结合降落PCR (TD PCR)和侧向层析(LFA)技术,采用40 nm的胶体金标记抗地高辛抗体,检测线和质控线分别包被链霉亲和素和羊抗鼠IgG,组装成LFA方法通用胶体金层析试纸条.两条特异性引物5'端分别标记地高辛和生物素,以Mo的全基因组为模板进行降落PCR,产物滴加于试纸条上样垫,检测结果可在15 min内读取.通过对各环节的调整优化,建立了检测Mo病原的TD PCR-LFA快速检测方法.结果显示:该方法仅对MO检测呈阳性,对其它病原菌检测均为阴性,表明该方法特异性良好.其检测下限为3×102 ccu/mL,敏感性较强.不同批次的PCR产物、不同批次的试纸条读取结果均一致,表明重复性和稳定性较好.本研究建立的Mo检测方法整合了TD PCR的特异性、敏感性和金标条快速、简单的特性,在2h内可完成检测,为建立适用于基层的临床检测方法奠定了基础.

关键词：绵羊肺炎支原体、降落PCR、金标侧向层析技术、快速检测

所属期刊栏目：39

分类号：S852.62(动物医学（兽医学）)

资助基金：国家自然科学基金项目31360226;高层次人才科研启动资金专项CZX201138

在线出版日期：2017-08-31（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共5页

页码：466-470