用于构建双价禽流感DNA疫苗的双目的基因表达质粒的构建及鉴定

摘要：

为探索构建禽流感双价或多价DNA疫苗的可行性,本研究以本实验室前期研制的禽流感DNA疫苗pCAGGoptiHA5为基础[其中含有禽流感病毒(AIV)A/Goose/GuangDong/1/96(H5N1)的HA基因],将增强型绿色荧光蛋白(eGFP)报告基因作为第二个目的基因,利用双启动子启动、内部核糖体进入位点(IRES)介导以及通过蛋白Linker编码序列连接融合表达两个目的基因的形式,构建了双启动子重组表达质粒pH5-eGFP、IRES介导的重组表达质粒pHIE以及融合表达重组质粒pH6E.并采用脂质体介导将这3种重组质粒分别转染293T细胞,通过间接免疫荧光试验和western blot方法检测HA和eGFP这两种目的蛋白的瞬时表达情况.结果显示,这3种重组质粒均能够正确表达AIV的HA蛋白和eGFP.其中pH5-eGFP表达出两个独立的目的蛋白,而且互相不影响各自的表达和细胞定位;pH6E则以融合形式表达两种目的蛋白,由于HA蛋白具有膜定位信号,所以融合蛋白主要定位于细胞膜上.本研究结果表明,双启动子表达质粒和双目的蛋白融合表达质粒适合用于构建AIV以及其他相关病原的双价DNA疫苗.

关键词：DNA疫苗、双价表达质粒、eGFP

所属期刊栏目：38

分类号：S852.65(动物医学（兽医学）)

资助基金：“十二五”农村领域国家科技计划2015BAD12B03/001

在线出版日期：2016-06-03（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共5页

页码：257-261