新城疫病毒中强毒株核酸检测用标准样品的研制

摘要：

为制备新城疫病毒(NDV)中强毒株核酸检测阳性标准参考样品,本研究以NDV中强毒株RNA为模板,设计NDV融合蛋白F基因特异性引物,通过RT-PCR扩增全长F基因,克隆于pGEM-T载体中,采用体外转录方法制备RNA纯品,初步定量稀释后,混合分装作为核酸标准样品候选物.采用荧光定量RT-PCR方法进行均匀性和稳定性检验,并委托其他实验室采用外标定量RT-PCR方法对转录的RNA片段进行定值.通过绘制荧光定量标准扩增曲线计算标准物质含量(拷贝),并根据委托单位的定值结果进行不确定度的估算.均一性结果显示瓶间差异小于5％,稳定性试验表明室温20℃～25℃14d,2℃～8℃3个月以及-20℃保存一年RNA的含量均无明显变化.核酸标准样品定值为(1.632±0.029)×107拷贝,可以用作NDV中强毒株核酸检测的标准质控品.

关键词：新城疫病毒、荧光定量RT-PCR、标准样品

所属期刊栏目：36

分类号：S852.65(动物医学（兽医学）)

资助基金：国家质检总局科研项目2011IK010

在线出版日期：2014-08-07（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共5页

页码：462-466