烟草疫霉菌LAMP检测方法的建立及验证

摘要：

为了建立烟草疫霉菌(Phytophthora parasitica)可视化快速检测方法,试验以羟基萘酚蓝(HNB)为指示剂,以烟草疫霉菌特异的核糖体转录间隔区(Internal transcribed spacer,ITS)为目的DNA片段,应用LAMP设计软件设计4条引物,通过优化LAMP反应体系和反应条件,建立一种准确快速的LAMP检测方法,并对该检测方法的特异性、灵敏度及实际应用效果进行验证.结果表明,本试验建立的烟草疫霉菌LAMP反应体系具有较好特异性且灵敏度较高.特异性检测只有烟草疫霉菌株LAMP产物为阳性(蓝色),且电泳结果能够产生梯形条带;灵敏度验证在DNA水平上可达到100 fg,是普通PCR检测方法的1000倍.对田间疑似黑胫病病株及其根际土样提取的DNA进行LAMP检测,各有3份样本为阳性,且病株检测结果与组织分离法对烟草疫霉的检测结果相一致;接种2 d后,病害症状还不明显的烟株中即可检测到烟草疫霉菌.本研究建立的烟草疫霉LAMP检测体系,可快速、简捷地检测到病株及其携带土壤中的烟草疫霉菌.

关键词：烟草疫霉菌、烟草黑胫病、环介导等温扩增(LAMP)、羟基萘酚蓝(HNB)

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资助基金：河南省烟草公司科学研究与技术开发重点项目"河南烟草病虫害绿色防控关键技术研究与应用";"基于微生物拮抗原理的烟草真菌性病害防控技术研究"

在线出版日期：2020-03-25（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共7页

页码：74-80