人B7-H4-Fc融合蛋白的表达及其应用研究

摘要：

B7-H4分子是近年发现的一个新的协同刺激分子，它通过抑制T细胞的增殖、细胞因子的分泌以及细胞周期的进行，进而下调T细胞的免疫功能。为获取人B7-H4 IgG融合蛋白，研究其对T细胞的调节效应，采用PCR法分别从pEGZ-Term/PD-L1-Fc和含人B7-H4基因序列的重组质粒中扩增出人IgG Fc恒定区基因及人B7-H4基因的胞外段序列，将两者插入逆转录病毒载体pEGZ-Term中，构建pEGZ-Term/B7-H4-Fc逆转录病毒重组载体，用脂质体法与两个辅助病毒载体共转染293T包装细胞，用含病毒颗粒的培养上清反复感染CHO细胞。用Zeocin筛选能稳定分泌人B7-H4-Fc融合蛋白的基因转染细胞并亚克隆之，经大量培养增殖，裂解细胞后收集裂解上清用Protein G柱纯化，再经Western blot鉴定。以体外T细胞活化体系观察其对T细胞活化的抑制作用。结果表明，成功地构建了表达人B7-H4-Fc融合蛋白的重组逆转录病毒载体；获得的CHO/B7-H4-Fc细胞能稳定分泌人B7-H4-Fc融合蛋白，该融合蛋白可以有效地抑制T细胞的活化。

关键词：B7-H4-Fc融合蛋白、T细胞活化、抑制

分类号：Q816(生物工程学(生物技术))

在线出版日期：2013-09-11（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共5页

页码：221-225