载外源性TGF-β1甲基丙烯酰化明胶复合支架促进颅骨缺损修复实验研究
目的 通过外源性TGF-β1加载修饰甲基丙烯酰化明胶(gelatin methacryloyl,GelMA)水凝胶,制备可修复SD大鼠颅骨缺损的骨组织工程支架.方法 首先制备含浓度为0、150、300、600、900、1 200 ng/mL外源性TGF-β1的GelMA水凝胶复合支架(分别设为A、B、C、D、E、F组),运用细胞计数试剂盒8(cell counting kit 8,CCK-8)法检测培养1、4、7 d各组支架对SD大鼠BMSCs增殖活性的影响;通过ALP染色、茜素红染色、骨钙素(osteocalcin,OCN)免疫荧光染色及Western blot检测探究对BMSCs成骨分化的影响,筛选最适浓度的TGF-β,/GelMA水凝胶支架.取36只8周龄SD大鼠制备5 mm直径颅骨骨缺损模型后随机均分为3组,分别为对照组、GelMA组和GelMA+TGF-β1组(采用最适浓度TGF-β1/GelMA水凝胶支架),术后4、8周分别处死大鼠行micro-CT、HE染色和OCN免疫组织化学染色观察颅骨缺损修复效果.结果 CCK-8法检测示各组TGF-β1/GelMA水凝胶支架对BMSCs增殖均有促进作用,D组作用最强,细胞活性显著高于其余各组(P＜0.05).ALP染色、茜素红染色、OCN免疫荧光染色和Western blot检测结果表明,D组BMSCs的ALP阳性面积百分比、茜素红阳性面积百分比、ALP和OCN蛋白相对表达量均显著高于其余各组(P＜0.05),成骨作用最强.因此体外实验筛选出TGF-β1/GelMA水凝胶支架最适浓度为600 ng/mL.大鼠颅骨缺损修复实验micro-CT、HE染色和OCN免疫组织化学染色示,术后4、8周,TGF-β1+GelMA组新生骨质最多,新生骨组织和骨体积/组织体积比值均显著高于GelMA组和对照组(P＜0.05).结论 浓度为600 ng/mL的TGF-β1/GelMA水凝胶支架具有促BMSCs成骨分化作用,能够显著促进颅骨缺损部位骨再生,可作为生物活性材料应用于骨组织再生.
外源性TGF-β1、甲基丙烯酰化明胶水凝胶、BMSCs、成骨分化、骨再生、骨缺损
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蚌埠医学院自然科学重点项目;安徽省自然科学研究重大项目
2021-08-18（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）
共9页
904-912
