丝素蛋白-左旋聚乳酸微载体扩增脂肪来源干细胞的实验研究

摘要：

目的 探讨丝素蛋白-左旋聚乳酸(silk fibroin-poly-L-lactic acid, SF-PLLA)微载体对脂肪来源干细胞(adipose-derived stem cells,ADSCs)的扩增作用及对其分化能力的影响.方法 使用脂肪抽吸术患者自愿捐赠脂肪组织,经酶消化法提取ADSCs.取第3代ADSCs分别接种于CultiSpher G和SF-PLLA微载体(分别设为A、B组),细胞-微载体复合物应用旋转生物反应器培养,并采用正常二维平面传代培养的ADSCs作为对照组(C组).应用扫描电镜观察两种微载体结构及细胞生长状况;Live/Dead染色观察细胞在两种微载体上分布及成活情况;DNA定量法检测两种微载体上细胞增殖情况;培养18d实时荧光定量PCR (real-time fluorescence quantitative PCR,qRT-PCR)检测3组ADSCs成软骨、成骨、成脂相关基因表达,行流式细胞术鉴定MSCs表面标志物,并行成软骨、成骨、成脂三系分化鉴定.结果 ADSCs在两种微载体上均可黏附并实现高效扩增,扩增18d时两种微载体上ADSCs总扩增量差异无统计学意义(P＞0.05).对扩增所得ADSCs行qRT-PCR检测示,与C组比较,B组成软骨相关基因(蛋白聚糖、软骨寡聚基质蛋白、软骨特异性基因SOX9)呈显著上调,A组成脂相关基因(过氧化物酶体增殖物激活受体γ、脂蛋白酯酶、脂联素基因)呈显著上调,差异均有统计学意义(P＜0.05).流式细胞术检测与三系分化鉴定显示两种微载体扩增后细胞仍为ADSCs,仍具有三系分化能力.结论 SF-PLLA微载体可用于扩增ADSCs,且扩增所得细胞成软骨分化趋势显著提高,成脂分化趋势降低.

关键词：丝素蛋白-左旋聚乳酸;微载体;动态培养;脂肪来源干细胞

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资助基金：中国医学科学院医学与健康科技创新工程2017-I2M-1-007

在线出版日期：2021-06-11（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共9页

页码：611-619