人羊膜间充质干细胞外泌体通过微小RNA-135a促进成纤维细胞迁移实验研究
目的 研究人羊膜间充质干细胞外泌体(human amniotic mesenchymal stem cell exosome,hAMSC-Exo)中的微小RNA-135a (microRNA-135a,miR-135a)对成纤维细胞迁移的作用.方法 用外泌体分离试剂盒提取hAMSC-Exo并进行鉴定,划痕实验检测hAMSC-Exo对成纤维细胞迁移的作用.实时荧光定量PCR (real-timefluorescence quantitative PCR,qRT-PCR)检测过表达miR-135a后hAMSC-Exo中miR-135a基因相对表达量,划痕实验检测过表达和敲减miR-135a后hAMSC-Exo对成纤维细胞迁移的作用,Western blot检测过表达和敲减miR-135a后hAMSC-Exo成纤维细胞迁移相关蛋白[大分子肿瘤抑制因子2(large tumor suppressor 2,LATS2)、E-钙黏着蛋白(E-cadherin)、N-cadherin、α平滑肌肌动蛋白(csmooth muscle actin,α-SMA)]的相对表达量;均以293T细胞外泌体及hAMSC-Exo作为对照.结果 成功获得hAMSC-Exo;划痕实验检测示,hAMSC组促进成纤维细胞迁移能力最强,GW4869(外泌体抑制剂)处理hAMSC组促进成纤维细胞迁移能力减弱.qRT-PCR检测示过表达miR-135a后,hAMSC-Exo中miR-135a基因相对表达量明显增加.划痕实验检测示,过表达miR-135a后,hAMSC-Exo促进成纤维细胞迁移能力增强;而敲减miR-135a后,hAMSC-Exo促进成纤维细胞迁移能力减弱.Western blot检测成纤维细胞迁移相关蛋白显示,与293T细胞外泌体组比较,各hAMSC-Exo处理组均下调E-cadherin、N-cadherin和LATS2表达,上调α-SMA表达;其中过表达miR-135a后,hAMSC-Exo能力增强,敲减miR-135a后,hAMSC-Exo能力较过表达miR-135a组下降.结论 hAMSC-Exo中的miR-135a可促进成纤维细胞迁移,抑制E-cadherin、N-cadherin和LATS2表达,促进α-SMA表达.
人羊膜间充质干细胞、外泌体、miR-135a、成纤维细胞
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R737.11;Q784;R329.24
贵州省科技计划;国家自然科学基金;国家自然科学基金;贵州省遵义市汇川区科技项目
2020-05-11（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）
共6页
234-239
