BMP-7/聚乳酸-羟基乙酸共聚物缓释微球对兔BMSCs增殖和成软骨分化的影响
目的 通过体外实验探讨载负BMP-7的聚乳酸-羟基乙酸共聚物[poly (lactide-co-glycolide),PLGA]缓释微球对兔BMSCs增殖和成软骨分化的影响.方法 采用复乳化-液中干燥法制备BMP-7/PLGA缓释微球,并将BMP-7/PLGA缓释微球与软骨分化培养基混合后,在第1、3、7、14、21天收集其上清液作为体外释放液.取3～5日龄新西兰乳兔双侧股骨及胫骨分离培养BMSCs,取第3代BMSCs分为微球组和对照组,微球组在每2～3天换液过程中更换为200 μL不同时间点的BMP-7/PLGA缓释微球体外释放液,对照组使用等体积软骨诱导培养液.采用MTT法测定两组培养1、3、7、14、21d的吸光度(A)值,检测细胞增殖情况;培养21d行番红O染色、甲苯胺蓝染色和Ⅱ型胶原免疫组织化学染色观察,并于1、3、7、14、21d采用阿利新蓝染色法测定糖胺聚糖(glycosaminoglycan,GAG)含量,检测成软骨细胞分化能力.结果 MTT检测示,培养1、3、7d两组细胞均迅速增殖;7d后对照组增殖速度变缓,微球组仍呈持续快速增殖.培养1、3、7d两组A值比较差异无统计学意义(P＞0.05),14、21d微球组A值显著高于对照组(P＜0.05).培养21d与对照组比较,微球组番红O染色可见几乎所有细胞核被染成鲜红色,甲苯胺蓝染色可见几乎所有细胞核出现异染性紫红色,Ⅱ型胶原免疫组织化学染色可见多数细胞核呈黄色或棕黄色,Ⅱ型胶原表达为强阳性.阿利新蓝染色法测定示,培养各时间点两组细胞GAG含量呈持续增高趋势,7d后对照组增高趋势减缓,微球组仍呈持续高分泌状态.培养1、3、7d两组GAG含量比较差异无统计学意义(P＞0.05),14、21d微球组GAG含量显著高于对照组(P＜0.05).结论 复乳化-液中干燥法制备的BMP-7/PLGA缓释微球在体外具有促进兔BMSCs增殖和向软骨细胞分化的能力.
BMP-7、聚乳酸-羟基乙酸共聚物、缓释微球、BMSCs、兔
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R730.43;R382.3;R944.9
国家自然科学基金;国家自然科学基金
2018-06-07（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）
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428-433
