慢病毒介导NEP1-40及NT-3双基因转染神经干细胞的实验研究
目的 通过慢病毒载体将NEP1-40 (Nogo extracellular peptide residues 1-40)及神经营养因子3 (neurotrophin 3,NT-3)双基因转染入神经干细胞(neural stem cells,NSCs)内进行表达,探讨NEP1-40及NT-3双基因转染NSCs的可行性,为NSCs体内实验奠定基础.方法 将SD大鼠胚胎室管膜区NSCs采用空载慢病毒载体(A组)、NEP1-40慢病毒载体(B组)、NT-3慢病毒载体(C组)及NEP1-40和NT-3慢病毒载体(D组)进行转染,以未转染病毒的细胞作为对照组(E组).用感染复数(multiplicity of infection,MOI)为5、10、15的慢病毒载体分别转染24、48、72 h,荧光显微镜观察转染后细胞内荧光表达情况,确定慢病毒载体的最佳MOI和收样时间.再分别通过实时荧光定量PCR及Western blot,检测转染后细胞中NEP1-40及NT-3基因的表达,以及细胞和培养基中NEP1-40及NT-3蛋白的表达.结果 荧光显微镜观察示,MOI为10时NEP1-40和NT-3基因慢病毒载体在NSCs内转染率最高,最佳时间为转染48 h时.实时荧光定量PCR及Western blot检测示,B、D组NEP1-40 mRNA相对表达量和蛋白相对表达量均显著高于A、C组,差异有统计学意义(P＜0.05);A、C组间及B、D组间比较差异无统计学意义(P＞0.05).C、D组NT-3 mRNA相对表达量和蛋白相对表达量均显著高于A、B组,差异有统计学意义(P＜0.05);A、B组间和C、D组间比较差异无统计学意义(P＞0.05).结论 通过慢病毒载体可将NEP1-40及NT-3双基因成功转染入NSCs内,在NSCs内稳定表达,且两种目的基因在表达过程中无相互拮抗或促进作用.
神经干细胞、NEP1-40、神经营养因子3、慢病毒载体、转染
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四川省科技厅科技支撑项目2015SZ0170
2018-06-07（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）
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