H2O2下调miR-21对MC3T3-E1细胞成骨分化影响的研究
目的 探讨H2O2诱导的miR-21下调对MC3T3-E1细胞成骨分化的作用及机制.方法 取MC3T3-E1细胞系,培养传至第7代进行实验.取MC3T3-E1细胞,以不同浓度H2O2(0、40、80、160、320μmol/L)培养,经实时荧光定量PCR检测miR-21表达、MTS法检测细胞活性,选择H2O2最合适实验浓度.取MC3T3-E1细胞分为空白对照组(A组)、H2O2组(B组)、成骨诱导组(C组)、H2O2+成骨诱导组(D组),对应培养后实时荧光定量PCR检测miR-21表达以及成骨标志基因Runx2、骨桥蛋白(osteopontin,OPN)及Ⅰ型胶原蛋白(collagen type Ⅰ alpha 1,Col1a1)表达,Western blot检测磷酸酶与张力蛋白同源物(phosphatase and tensin homolog,PTEN)蛋白表达,茜素红染色观察细胞外钙基质沉积情况,分析H2O2对MC3T3-E1细胞成骨分化的影响.然后再取MC3T3-E1细胞,分为H2O2组(A1组)、H2O2+成骨诱导组(B1组)、H2O2+miR-21抑制剂+成骨诱导组(C1组)、H2O2+miR-21抑制剂阴性对照+成骨诱导组(D1组);以及H2O2组(A2组)、H2O2+成骨诱导组(B2组)、H2O2+siRNA-PTEN阴性对照+成骨诱导组(C2组)、H2O2+siRNA-PTEN+成骨诱导组(D2组);对应培养后检测成骨标志基因(Runx2、OPN、Col1a1)表达以及细胞外钙基质沉积情况,分析下调miR-21或沉默PTEN对细胞成骨分化的影响.结果 结合实时荧光定量PCR检测以及MTS法结果,选择160μmol/LH2O2进行实验.第1、2周B组miR-21相对表达量低于A组(P＜0.05),D组低于C组(p＜0.05);第2周C组PTEN蛋白相对表达量均低于A、D组(P＜0.05);第1、2周D组Runx2、OPN及Col1a1 mRNA相对表达量均低于C组(P＜0.05),茜素红染色显示D组钙基质沉积少于C组.C1组PTEN蛋白相对表达量高于D1组(P＜0.05);第1、2周B1、D1组Runx2、OPN mRNA相对表达量均高于C1组(P＜0.05),第2周B1、D1组Col1a1 mRNA均高于C1组(P＜0.05);茜素红染色显示C1组钙基质沉积少于B1、D1组.第1周D2组OPN、Col1a1 mRNA相对表达量高于B2、C2组(p＜0.05),第3周茜素红染色显示D2组钙基质沉积明显多于B2、C2组.结论 H2O2抑制MC3T3-E1成骨分化可能与miR-21下调有关.
H2O2、氧化应激、miR-21、成骨分化、MC3T3-E1细胞
32
National Natural Science Foundation of China 31430030国家自然科学基金资助项目31430030
2021-07-16（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）
共9页
276-284
