深温冷冻对大鼠髌腱组织内肌腱干细胞生物学特性影响的研究
目的 探讨深低温冷冻处理对大鼠髌腱组织中肌腱干细胞(tendon-derived stem cells,TDSCs)的成活、细胞活力、早期凋亡、迁移能力及肌腱相关基因表达的影响.方法 取12只4月龄雄性SD大鼠双侧髌腱组织,其中6只大鼠12条髌腱组织(实验组)进行深低温冷冻处理;剩余髌腱组织(对照组)不作处理,作为正常对照.取两组髌腱组织用0.3％Ⅰ型胶原酶消化获得有核细胞,分别用锥虫蓝染色检测有核细胞成活率、结晶紫染色检测有核细胞克隆形成能力;取两组髌腱组织分离培养TDSCs,并传至第3代,采用Alamar Blue法检测细胞体外增殖能力;Annexin Ⅴ-FITC/PI双染法检测细胞早期凋亡率;Transwell法检测细胞迁移能力;实时荧光定量PCR检测细胞肌腱相关基因Ⅰ型胶原(collagen type Ⅰ,Col1α1)、scleraxis (Scx)和tenomodulin (Tnmd) mRNA表达.结果 与对照组(91.00％±3.63％)比较,实验组原代有核细胞成活率为61.65％±4.76％,差异有统计学意义(t=12.010,P=0.000).两组有核细胞接种后,均呈克隆样生长;培养12d,实验组每1 000个有核细胞克隆集落形成数为(8.41±0.33)个,较对照组(15.19±0.47)个显著减少(t=28.910,P=0.000).实验组TDSCs占活性有核细胞比例为1.37％±0.09％,较对照组1.67％±0.10％显著减少(t=5.508,P=0.003).第3代TDSCs培养14d内两组细胞生长趋势一致;两组各时间点吸光度(A)值比较,差异均无统计学意义(P＞0.05).实验组及对照组TDSCs早期凋亡率分别为1.67％±0.06％、1.63％±0.06％,比较差异无统计学意义(t=0.707,P=0.519).镜下见,两组均有TDSCs黏附于Transwell小室下室,实验组细胞数为(445.00±9.70)个,对照组为(451.50±12.66)个,比较差异无统计学意义(t=0.998,P=0.342).实验组Col1α1、Scx、Tnmd的mRNA相对表达量分别为3.498±0.065、0.062±0.002、(4.211±0.211) ×10-5,对照组分别为3.499±0.113、0.062±0.001、(4.341±0.274) ×10-5,比较差异均无统计学意义(t=0.013,P=0.991;t=0.042,P=0.969;t=0.653,P=0.549).结论 大鼠肌腱组织经深低温冷冻后其有核细胞成活率降低,但肌腱组织仍保留大量有活性TDSCs,且细胞增殖能力、早期凋亡率、体外迁移能力及成肌腱分化能力未见明显异常.
深低温冷冻、肌腱干细胞、肌腱缺损、同种异体肌腱移植、成肌腱分化
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R735.7;R329.28;Q254
2017-08-07（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）
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