一种优化的猪骨骼肌来源无细胞基质支架材料制备方法及鉴定
目的 探讨一种优化的猪骨骼肌脱细胞制备方法,以期制备理想的猪骨骼肌来源无细胞基质(decellularized porcine muscle tissue,DPMT)支架材料.方法 取市售新鲜健康成年家猪腰部骨骼肌组织,采用匀浆-球磨-去垢剂多步骤脱细胞方案制备DPMT.行组织学观察脱细胞、脱脂效果,天狼猩红染色分析胶原成分,扫描电镜观察材料内部微结构;测定材料中DNA含量及总蛋白质含量.取人脂肪来源干细胞(adipose derived stem cells,ADSCs)、小鼠成纤维细胞(NIH3T3)和人脐静脉内皮细胞(human umbilical vein endothelial cells,HUVECs),置于不同浓度DPMT浸提液中,培养后第1、3、5天采用细胞计数试剂盒8法测算细胞相对增殖率,评价材料细胞毒性;通过DPMT表面接种HUVECs体外共培养3d后,行活死细胞染色评价其体外细胞相容性.采用SPF级雄性SD大鼠建立DPMT大鼠背部皮下植入模型,于植入3、7、14、28 d取材,大体观察材料降解情况,并测量其横径;行HE染色和CD31免疫组织化学染色观察其生物相容性和血管新生情况.结果 匀浆-球磨-去垢剂多步骤脱细胞方法操作简便,制备DPMT仅需ld时间;检测显示DPMT脱细胞、脱脂完全,主要成分为Ⅰ型胶原及Ⅳ型胶原;DPMT中DNA含量为(15.902±1.392) ng/mg干重,总蛋白质含量占其干重的68.94％,显著低于新鲜猪骨骼肌组织[分别为(140.724±10.422) ng/mg干重及93.14％] (P＜0.05);DPMT内部呈均质疏松网状结构.体外细胞相容性实验显示DPMT细胞毒性评级均为0～1级,HUVECs在DPMT表面能稳定生长.DPMT大鼠皮下植入后14 d内可保持大体结构的稳定性,至28 d时完全降解;炎性反应在3d时最明显,7d时明显减轻,两时间点炎性细胞数量比较差异有统计学意义(P＜0.05);植入后7d即可见DPMT内部新生血管环结构形成,14 d时新生血管环数量显著增加,比较差异有统计学意义(P＜0.05).结论 匀浆-球磨-去垢剂多步骤脱细胞方案省时高效、可重复性佳,所制备的DPMT脱细胞、脱脂完全,蛋白质成分保存良好,具有良好的体内外生物相容性,且可能具有一定诱导血管新生潜能.
组织工程、支架材料、猪骨骼肌、无细胞基质、生物相容性、血管新生
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TB383;R318;R962
2016-11-10（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）
1282-1289
