腺病毒介导人TGF-β1基因转染自体腘绳肌腱重建兔前交叉韧带术后的表达
目的 检测腺病毒介导人TGF-β1(human TGF-β1,hTGF-β1)基因转染至胭绳肌腱重建兔前交叉韧带(anterior cruciate ligament,ACL)术后不同时间点的表达.方法 以DMEM培养基稀释重组腺病毒载体Ad-hTGF-β1与腺病毒空载体Ad-绿色荧光蛋白(green fluorescent protein,GFP),使病毒滴度为5×108 PFU/mL.取15～20月龄雄性新西兰大白兔48只,随机分为A、B、C3组(n=16),以兔双侧后肢膝关节为研究对象,取自体胭绳肌腱重建同侧ACL,重建前A、B组腘绳肌腱分别以Ad-hTGF-β1及Ad-GFP转染12h,C组以DMEM培养作为对照组.转染后12h应用荧光显微镜观察A、B组绿色荧光表达,ELISA法检测A组胭绳肌腱中TGF-β1蛋白表达量.术后2、4、6、8周取材,应用实时荧光定量PCR及Western blot法检测腘绳肌腱中hTGF-β1基因及蛋白表达.结果 A、B组胭绳肌腱经转染后均可见绿色荧光表达;ELISA法检测示,A组胭绳肌腱中TGF-β1蛋白表达量为(221.0±12.2) ng/mL.实时荧光定量PCR检测示,术后各时间点B、C组均未能检测到hTGF-β1mRNA表达;术后2、4、6、8周,A组hTGF-β1 mRNA相对表达量逐渐下降,分别为1.004±0.072、0.785±0.038、0.469±0.053、0.172±0.021,各时间点间比较差异均有统计学意义(P＜0.05).Western blot检测示,术后各时间点B、C组TGF-β1蛋白条带均为弱阳性,A组TGF-β1蛋白表达量均显著高于B、C组(P＜0.05),B、C组间比较差异无统计学意义(P＞0.05).A组TGF-β1蛋白表达量随时间延长逐渐降低,各时间点间比较差异均有统计学意义(P＜0.05).结论 在腺病毒载体介导下,hTGF-β1基因能成功转染至腘绳肌腱并能在ACL重建术后有效表达.
人TGF-β1、腺病毒、腘绳肌腱、前交叉韧带、兔
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2013年湖南省教育厅资助项目13C836Education Department Command of Hunan Province in 2013 13C836
2016-11-10（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）
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