miRNA-203转染诱导人表皮干细胞向汗腺细胞分化的研究
目的 探讨miRNA-203转染诱导人表皮干细胞向汗腺细胞分化的可能性及机制.方法 取包皮环切术获得的人正常包皮组织5例,采用0.25％胰蛋白酶-EDTA联合消化法分离表皮和真皮,应用Ⅳ型胶原差速贴壁法纯化人表皮干细胞,倒置相差显微镜下观察细胞生长状况,行β1整合素(integrin β1,ITGB1)、角蛋白19(cytokeratin 19,CK19)、CK1、CK10、CK18、癌胚抗原(carcinoembryonic antigen,CEA)免疫细胞化学染色鉴定.通过脂质体转染将miRNA-203模拟物导入人表皮干细胞(实验组),转染对照miRNA模拟物作为对照组.免疫细胞化学染色法对转染后细胞行ITGB1、CK19、CK1、CK10、CK18、CEA单克隆抗体检测鉴定;实时荧光定量RT-PCR检测转染前及转染后72 h的细胞中miRNA-203、P63、ITGB1、CK19、CK1、CK10、CK18、CEA mRNA相对表达量;Western blot法检测P63、ITGB1、CK19、CK1、CK10、CK18、CEA蛋白相对表达量;并对miRNA-203的mRNA表达与P63的mRNA和蛋白表达分别行Pearson相关分析.结果 转染前人表皮干细胞CK19、ITGB1阳性表达,转染后CK1、CK10、CK18、CEA阳性表达.实验组转染后细胞miRNA-203 mRNA相对表达量显著高于转染前(P＜0.05).实验组转染后细胞CK1、CK10、CK18、CEA mRNA及蛋白的相对表达量均高于转染前及对照组,而P63、CK19、ITGB1 mRNA及蛋白的相对表达量均低于转染前和对照组,比较差异均有统计学意义(P＜0.05).上述指标对照组与转染前比较差异均无统计学意义(P＞0.05).转染前后miRNA-203的mRNA表达量与P63的mRNA和蛋白相对表达量均成负相关,转染前相关系数分别为-0.91(t=3.862,P=0.042)及-0.96 (t=5.971,P=0.009);转染后相关系数分别为-0.92(t=4.283,P=0.031)及-0.95 (t=5.842,P=0.011).结论 miRNA-203能诱导人表皮干细胞分化为汗腺细胞,其作用可能是通过靶向抑制P63来实现的.
表皮干细胞、汗腺细胞、分化、miRNA-203、P63
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R730.45;S829.1;R329.26
2015-04-13（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）
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