负载BMP-2质粒的脂多糖胺纳米囊泡转染大鼠BMSCs的研究

摘要：

目的 应用脂多糖胺纳米囊泡(lipopolysaccharide-amine nanopolymersomes,LNPs)作基因载体,评价其与目的基因复合及其在BMSCs中的转染情况,为LNPs介导的基因联合干细胞治疗骨缺损提供初步实验依据. 方法 制备加载了BMP-2质粒(plasmid of BMP-2,pBMP-2)的LNPs (plasmid-loaded LNPs,pLNPs);通过凝胶阻滞实验探究pLNPs与pBMP-2结合能力随pLNPs中N元素和P元素比例(N/P)变化的关系;透射电镜及原子力显微镜下观察pLNPs (N/P=60)形貌;动态光散射仪检测其粒径及Zeta电位;探究pLNPs耐酶解能力随时间的变化规律;体外转染大鼠BMSCs,探究不同N/P条件下pLNPs转染后细胞存活率、转染效率,及最佳N/P条件下pLNPs转染BMSCs表达目标蛋白情况. 结果 当N/P≥1.5时,pLNPs可完全阻滞pBMP-2; N/P为60时,pLNPs在原子力显微镜下呈大小均一囊泡状,透射电镜下pLNPs呈典型的类球形空心囊泡状,直径(72.07±11.03)am;pLNPs粒径为(123±6)nm,Zeta电位为20 mV;pLNPs在4h内耐DNase Ⅰ酶解,6h时对核酸保护能力稍下降.细胞存活率随N/P增加呈先增加后降低趋势,N/P为45时达最大值,N/P≤90时细胞毒性分级为1级,可用于体内实验;pLNPs转染效率随N/P增加而增大,N/P为60时达最大值;综合确定最佳N/P为60.在N/P为60转染BMSCs条件下,4d内细胞持续高表达BMP-2. 结论 LNPs能高效压缩pBMP-2形成复合物纳米囊泡,保护目的基因不被酶解,较聚乙烯亚胺25k和Lipofectamine 2000有更高的转染效率及蛋白表达量.

关键词：基因治疗、脂多糖胺纳米囊泡、BMP-2质粒、BMSCs、大鼠

所属期刊栏目：28

分类号：R735.9;R318;R977.6

在线出版日期：2014-11-17（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页码：1292-1297