嗅鞘细胞无血清上清液诱导C17.2神经干细胞定向分化及分化后细胞活力检测
目的 探讨体外采用嗅鞘细胞(olfactory ensheathing cells,OECs)无血清上清液诱导小鼠C17.2神经干细胞(neural stem cells,NSCs)向神经元定向分化及分化后的细胞活力. 方法 采用新生3d昆明小鼠嗅球,分离培养OECs,并制备无血清上清液.C17.2 NSCs置于含15％FBS的H-DMEM/F 12培养基培养,传至第3代,待细胞生长至80％融合时,分别加入OECs无血清上清液(实验组)、H-DMEM/F 12培养基(对照组)诱导培养;以未诱导的C17.2NSCs作为空白对照组.倒置显微镜下观察诱导后细胞生长情况,于诱导5d后收集细胞行微管相关蛋白2(microtubule-associated protein 2,MAP-2)及β-微管蛋白Ⅲ (β-tubulin-Ⅲ)免疫荧光染色鉴定,Western blot检测细胞巢蛋白(Nestin)、β-tubulin-Ⅲ、MAP-2蛋白表达情况,检测乳酸脱氢酶(lactate dehydrogenase,LDH)漏出率并行MTT法检测细胞活力. 结果 实验组:诱导后24 h细胞胞体开始收缩,3d后分化的细胞明显增多,突触增长;对照组:诱导后24 h细胞形态无明显改变,3d后细胞胞体皱缩,细胞核质浓缩,并发生细胞裂解、破碎.诱导后5d,免疫荧光染色示实验组分化后细胞 β-tubulin-Ⅲ和MAP-2表达均呈阳性,对照组及空白对照组均无表达.Western blot检测显示实验组中NSCs标志物Nestin蛋白表达明显减少,神经元标志物β-tubulin-Ⅲ和MAP-2表达增加,与对照组及空白对照组比较差异均有统计学意义(P＜0.05).实验组LDH漏出率为130.60％±6.86％,显著低于对照组的178.20％±5.44％;细胞活力为62.20％±3.82％,显著高于对照组的18.00％±3.83％;比较差异有统计学意义(P＜0.05);但均低于空白对照组的100％ (P＜ 0.05). 结论 含有OECs分泌蛋白的OECs无血清上清液不仅能诱导NSCs向神经元分化,还能维持分化后细胞活力.
神经干细胞、嗅鞘细胞、诱导分化、细胞活力、小鼠
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R711.31;R364.3;S646
2014-06-12（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）
633-638
