角质细胞生长因子促进人胚神经干细胞增殖与分化的实验研究
目的 探讨人源性角质细胞生长因子2(human keratinocyte growth factor 2,hKGF-2)对体外长期培养人胚神经干细胞(human neural stem cells,hNSCs)存活和分化的影响. 方法 将液氮冻存17代hNSCs复苏常规培养7d形成神经球后,取少许行免疫细胞化学染色鉴定干细胞及分化细胞特异抗原.一部分神经球浓缩后种植至12孔培养板中,分为7组,每组6孔,均添加l mL基础培养液[含N2(1∶100)、20 ng/mL EGF的DMEM/F12培养基]后,B、C、D、E、F组分别添加10、30、60、90、120 ng/mL KGF-2,G组添加10 ng/mL bFGF,A组为空白对照组;培养7、14d观察并计数神经球与hNSCs,了解神经球生长与增殖情况.另一部分浓缩后种植至置有多聚赖氨酸包被玻片的6孔培养板内,分为4组,每组6孔,均添加3 mL DMEM/F12培养基后,A1、B1、C1、D1组对应加入N2(1∶100)、N2(1∶100)+90 ng/mL hKGF-2、FBS(1∶20)、FBS(1∶20)+ 90 ng/mL hKGF-2;培养14 d内观察神经球生长与分化情况.7d时各取5孔玻片行免疫荧光细胞化学鉴定和流式细胞仪检测,分析神经球的生长与分化状况. 结果 复苏后培养形成的神经球含大量巢蛋白阳性细胞,充满整个神经球;诱导分化后表达分化细胞特异性蛋白神经丝200(neurofilament200,NF-200)和胶质纤维酸性蛋白(glial fibrillary acidic protein,GFAP).各组神经球培养7d后均有不同程度增大;随hKGF-2浓度增加,神经球数量和hNSCs数目均依次增多,呈递增趋势,E、F、G组显著高于A、B、C、D组(P＜0.05);B、C、D组间两两比较差异亦有统计学意义(P＜0.05);但A、B组间以及E、F、G组间比较差异无统计学意义(P＞ 0.05).体外诱导过程中,A1、B1、C1、D1组分化细胞生长旺盛程度呈递增趋势,组间比较差异均有统计学意义(P＜ 0.05); B1组NF-200阳性率显著高于其余3组(P＜0.05),GFAP阳性率显著低于其余3组(P＜ 0.05); A1、C1、D1组间比较差异均无统计学意义(P＞0.05).培养14d后各组生长均达峰值,以星形细胞为主. 结论 体外培养17代的hNSCs系纯化hNSCs,hKGF-2能促进其增殖和诱导分化为神经元细胞.
人源性角质细胞生长因子2、人胚神经干细胞、增殖、分化
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Traditional Chinese Medicine Research Project of Chongqing Health Bureau2009-1-10;Project of Health Bureau of Sichuan Province07018;重庆市卫生局中医药科技项目渝中医2009-1-10;四川省卫生厅课题资助项目07018
2013-11-21（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）
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