同一供者及不同供者的人胎盘MSCs与脐静脉内皮细胞复合培养的比较研究
目的 比较同一供者及不同供者的人胎盘MSCs(human placenta-derived MSCs,HPMSCs)与人脐静脉内皮细胞(human umbilical vein endothelial cells,HUVECs)三维复合培养效果,为体外构建三维血管化组织工程骨提供实验依据. 方法 取健康足月产妇自愿捐赠的胎盘及脐带组织,采用Ⅳ型胶原酶消化和人淋巴细胞分层液密度梯度离心法分离培养HPMSCs,通过流式细胞学检测细胞表型,取第2代细胞向成骨细胞诱导培养鉴定;以Ⅰ型胶原酶消化分离培养HUVECs,通过Ⅷ因子相关抗原因子免疫组织化学染色进行鉴定.实验分为两组,A组取不同供者的第3代HUVECs和成骨诱导培养3周的第3代HPMSCs以1∶1比例复合种植于胶原水凝胶,制备细胞-胶原水凝胶复合物;B组将同一供者的以上两种细胞同法复合制各复合物.复合培养第1、3、5、7天取材,行CD31免疫荧光染色,于激光共聚焦显微镜下观察其成血管倾向,测量复合物中的索道长度和节点数,并进行统计学分析. 结果 经鉴定,成功分离培养HPMSCs及HUVECs.CD31免疫荧光染色示,与A组相比,B组细胞-胶原水凝胶复合物中的HUVECs可在三维空间上较早、较好地伸展,在水凝胶内部相互交织能力较强,形成的索道更长,节点更多,网络更密集.第7天时B组索道长度和节点数分别为(8.11±0.62) mm/mm2及(2130±1.41)个/mm2,显著优于A组的(6.68±0.35) mm/mm2及(17.10±1.10)个/mm2,差异均有统计学意义(t=0.894,P=0.000; t=0.732,P=0.000). 结论 将同一供者的HPMSCs与HUVECs 体外复合种植于胶原水凝胶支架上,比不同供者来源的细胞形成的网络成血管倾向更明显,交织连续性好,层次丰富.
组织工程骨、血管化、人胎盘MSCs、人脐静脉内皮细胞、复合培养
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国家教育部留学回国人员启动基金资助项目教外司留2012940号;Scientific Research Foundation for the Returned Overseas Chinese Scholars of State Education Ministry2012940
2013-11-11（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）
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