人孤雌胚胎干细胞无饲养层培养体系的建立

摘要：

目的 建立一种安全、有效、经济且适于人孤雌胚胎干细胞(human parthenogenetic embryonic stem cells,hPESCs)体外培养的无饲养层培养体系. 方法 将常规体外培养的hPESCs分别以mTeSRTMl培养基(对照组)和人包皮成纤维细胞的条件培养基(human foreskin fibroblasts-conditional medium,hFFs-CM)(实验组)扩增培养,倒置显微镜下观察两组无饲养层培养体系下hPESCs的生长状态;采用ALP检测和核型分析研究hPESCs生物学特性；采用RTPCR检测hPESCs全能性标记物Oct-4的表达情况；通过体外和体内分化实验观察hPESCs向3个胚层分化的潜能. 结果 两组hPESCs形态规则、不易分化,在形态、扩增速度等方面无明显差异；已成功在体外培养15代,两组均能保持正常女性的二倍体核型46,XX和全能性；RT-PCR检测示两组Oct-4 mRNA均呈阳性表达；体外分化均可形成拟胚体；在裸鼠体内均可形成含有3个胚层组织成分的畸胎瘤. 结论 hFFs-CM无饲养层培养体系可长期支持hPESCs的生长并维持其未分化状态,成功建立了一种不仅能维持hPESCs的有效扩增、减少动物源性污染、降低培养成本,还可满足临床大规模应用的hPESCs无饲养层培养体系.

关键词：人孤雌胚胎干细胞、无饲养层、条件培养基、人包皮成纤维细胞

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资助基金：云南省应用基础研究计划项目2013FZ179

在线出版日期：2013-07-05（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共6页

页码：559-564